CAJ | 학술논문

本研究旨在建立从K562细胞系中提取热休克蛋白GP96的方法,进而研究GP96对人树突状细胞分化和功能的影响.采用蛋白分离提纯技术,将K562细胞裂解,经饱和硫酸铵沉淀、亲和层析、离子交换层析后提纯出热休克蛋白GP96,用SDs-PAGE凝胶电泳和Western blot方法对其进行鉴定.将提纯的GP96加入从正常人外周血单个核细胞诱导培养的树突状细胞(dendritic cell,DC)中,通过流式细胞术检测DC细胞表型变化,用MTT法测定混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR).结果表明:从1×1010K562细胞中能提纯出热休克蛋白GP96 60-80 μg;加入GP96制备的HSP-DC,其细胞表面标志CD83、CD86和HLA-DR的表达率比常规培养DC明显升高,CD1a表达率降低(P＜0.05);HSP-DC比常规培养DC具有更强的刺激混合淋巴细胞反应的能力(P＜0.05).结论:从K562细胞中可以提取出热休克蛋白GP96;热休克蛋白GP96可以促进树突状细胞分化成熟,使其具有更强的刺激同种异体人T淋巴细胞增殖的能力.
본연구지재건립종K562세포계중제취열휴극단백GP96적방법,진이연구GP96대인수돌상세포분화화공능적영향.채용단백분리제순기술,장K562세포렬해,경포화류산안침정、친화층석、리자교환층석후제순출열휴극단백GP96,용SDs-PAGE응효전영화Western blot방법대기진행감정.장제순적GP96가입종정상인외주혈단개핵세포유도배양적수돌상세포(dendritic cell,DC)중,통과류식세포술검측DC세포표형변화,용MTT법측정혼합림파세포반응(mixed lymphocyte reaction,MLR).결과표명:종1×1010K562세포중능제순출열휴극단백GP96 60-80 μg;가입GP96제비적HSP-DC,기세포표면표지CD83、CD86화HLA-DR적표체솔비상규배양DC명현승고,CD1a표체솔강저(P＜0.05);HSP-DC비상규배양DC구유경강적자격혼합림파세포반응적능력(P＜0.05).결론:종K562세포중가이제취출열휴극단백GP96;열휴극단백GP96가이촉진수돌상세포분화성숙,사기구유경강적자격동충이체인T림파세포증식적능력.