生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2005年
3期
255-258
,共4页
杨建强%刘刚%汤国营%戴红梅%朱厚础
楊建彊%劉剛%湯國營%戴紅梅%硃厚礎
양건강%류강%탕국영%대홍매%주후출
野生革耳菌%漆酶%改构%表达%毕赤酵母
野生革耳菌%漆酶%改構%錶達%畢赤酵母
야생혁이균%칠매%개구%표체%필적효모
在野生革耳漆酶的cDNA序列3'端添加15个核苷酸后得到突变基因lccT.将其克隆入表达载体pPICZαA,重组质粒pPICZαA/lccT经PmeⅠ线性化,电击转化毕赤酵母X-33细胞.经过菌落PCR鉴定的转化子pPICZαA/lccT-X-33在甲醇诱导后分泌表达活性重组漆酶LCCT,比未添加该段序列的野生革耳漆酶基因lcc在毕赤酵母中表达的活性提高2倍多.其培养液上清经凝胶过滤层析和离子交换层析后,得到了电泳纯的漆酶蛋白,以ABTS为底物在pH4.5时测得比活为3.68U/mg.根据SDS-PAGE测定的重组漆酶LCCT的表观相对分子质量为62600.
在野生革耳漆酶的cDNA序列3'耑添加15箇覈苷痠後得到突變基因lccT.將其剋隆入錶達載體pPICZαA,重組質粒pPICZαA/lccT經PmeⅠ線性化,電擊轉化畢赤酵母X-33細胞.經過菌落PCR鑒定的轉化子pPICZαA/lccT-X-33在甲醇誘導後分泌錶達活性重組漆酶LCCT,比未添加該段序列的野生革耳漆酶基因lcc在畢赤酵母中錶達的活性提高2倍多.其培養液上清經凝膠過濾層析和離子交換層析後,得到瞭電泳純的漆酶蛋白,以ABTS為底物在pH4.5時測得比活為3.68U/mg.根據SDS-PAGE測定的重組漆酶LCCT的錶觀相對分子質量為62600.
재야생혁이칠매적cDNA서렬3'단첨가15개핵감산후득도돌변기인lccT.장기극륭입표체재체pPICZαA,중조질립pPICZαA/lccT경PmeⅠ선성화,전격전화필적효모X-33세포.경과균락PCR감정적전화자pPICZαA/lccT-X-33재갑순유도후분비표체활성중조칠매LCCT,비미첨가해단서렬적야생혁이칠매기인lcc재필적효모중표체적활성제고2배다.기배양액상청경응효과려층석화리자교환층석후,득도료전영순적칠매단백,이ABTS위저물재pH4.5시측득비활위3.68U/mg.근거SDS-PAGE측정적중조칠매LCCT적표관상대분자질량위62600.
