CAJ | 학술논문

目的:观察从脐血中提取的树突状细胞负载热休克蛋白70-肿瘤抗原肽复合物的细胞表面表型特点及其所激活的细胞毒T淋巴细胞的杀伤活性.方法:实验于2003-10/2005-12在解放军军事医学院兽医研究所完成.①脐血来源于长春市妇产医院足月顺产的非高危妊娠产妇,要求无急慢性感染及血液系统疾病,产妇及其家属均签署知情同意书.热休克蛋白70由本室制备纯化.人骨肉瘤细胞Saos-2(北京肿瘤研究所,批号222RXB013538).②封闭式采集脐带血,体外分离脐血单个核细胞,调整浓度为1×109 L-1,接种于24孔细胞培养板,每孔均加入100μg/L人重组粒-巨噬细胞集落刺激因子、50μg/L白细胞介素4、10μg/L肿瘤坏死因子α.培养14 d后,鉴定细胞表面CD1a、HLA-DR的百分率.③用含胎牛血清的IMDM培养Saos-2骨肉瘤细胞至对数生长期,胰酶消化后调整细胞数为5×107 L-1.集传20代生长的Saos-2,冻融2次,低渗震荡,离心,上清用盐酸调pH至7.0,过滤后即为肿瘤抗原肽,与热休克蛋白70体外结合.④另取脐血40 mL,分离T淋巴细胞,诱导分化至第4天,加入热休克蛋白70-肿瘤抗原肽100μL,促使T淋巴细胞活化为细胞毒T淋巴细胞.⑤效应细胞(细胞毒T淋巴细胞)与靶细胞(Saos-2)按效靶比50∶1,25∶1,12.5∶1,6.25∶1,3.125∶1梯度,四甲基偶氮唑盐法检测细胞毒T淋巴细胞杀伤活性.结果:①细胞形态学观察:细胞因子诱导后第3天,镜下脐血细胞呈均匀散布的细胞聚体,胞体拉长;第7天可见不明显突起;第14天出现具有典型树枝状突起的树突状细胞.②细胞因子诱导后脐血单核细胞表面表型鉴定结果:经细胞因子诱导后,脐血单核细胞CD1a与HLA-DR表达率均较诱导前明显升高[0,(18.43±3.26)%;(4.03±1.66)%,(59.69±8.47)%;P均＜0.01].③细胞毒T淋巴细胞杀伤活性检测结果:培养72 h后,细胞毒T淋巴细胞与靶细胞Saos-2效靶比为50∶1时可杀伤决大部分肿瘤细胞,杀伤率为(97.50±11.24)%,效靶比从50∶1至3.125∶1可使靶细胞Saos-2生长呈梯度受到不同程度的抑制.单纯的树突状细胞及未经激活的T淋巴细胞对Saos-2细胞仅有微弱的生长抑制作用.结论:脐血来源的树突状细胞经过热休克蛋白70-肿瘤抗原肽复合物负载致敏后,激活的细胞毒T淋巴细胞对人骨肉瘤细胞Saos-2具有极强的杀伤能力. 目的:觀察從臍血中提取的樹突狀細胞負載熱休剋蛋白70-腫瘤抗原肽複閤物的細胞錶麵錶型特點及其所激活的細胞毒T淋巴細胞的殺傷活性.方法:實驗于2003-10/2005-12在解放軍軍事醫學院獸醫研究所完成.①臍血來源于長春市婦產醫院足月順產的非高危妊娠產婦,要求無急慢性感染及血液繫統疾病,產婦及其傢屬均籤署知情同意書.熱休剋蛋白70由本室製備純化.人骨肉瘤細胞Saos-2(北京腫瘤研究所,批號222RXB013538).②封閉式採集臍帶血,體外分離臍血單箇覈細胞,調整濃度為1×109 L-1,接種于24孔細胞培養闆,每孔均加入100μg/L人重組粒-巨噬細胞集落刺激因子、50μg/L白細胞介素4、10μg/L腫瘤壞死因子α.培養14 d後,鑒定細胞錶麵CD1a、HLA-DR的百分率.③用含胎牛血清的IMDM培養Saos-2骨肉瘤細胞至對數生長期,胰酶消化後調整細胞數為5×107 L-1.集傳20代生長的Saos-2,凍融2次,低滲震盪,離心,上清用鹽痠調pH至7.0,過濾後即為腫瘤抗原肽,與熱休剋蛋白70體外結閤.④另取臍血40 mL,分離T淋巴細胞,誘導分化至第4天,加入熱休剋蛋白70-腫瘤抗原肽100μL,促使T淋巴細胞活化為細胞毒T淋巴細胞.⑤效應細胞(細胞毒T淋巴細胞)與靶細胞(Saos-2)按效靶比50∶1,25∶1,12.5∶1,6.25∶1,3.125∶1梯度,四甲基偶氮唑鹽法檢測細胞毒T淋巴細胞殺傷活性.結果:①細胞形態學觀察:細胞因子誘導後第3天,鏡下臍血細胞呈均勻散佈的細胞聚體,胞體拉長;第7天可見不明顯突起;第14天齣現具有典型樹枝狀突起的樹突狀細胞.②細胞因子誘導後臍血單覈細胞錶麵錶型鑒定結果:經細胞因子誘導後,臍血單覈細胞CD1a與HLA-DR錶達率均較誘導前明顯升高[0,(18.43±3.26)%;(4.03±1.66)%,(59.69±8.47)%;P均＜0.01].③細胞毒T淋巴細胞殺傷活性檢測結果:培養72 h後,細胞毒T淋巴細胞與靶細胞Saos-2效靶比為50∶1時可殺傷決大部分腫瘤細胞,殺傷率為(97.50±11.24)%,效靶比從50∶1至3.125∶1可使靶細胞Saos-2生長呈梯度受到不同程度的抑製.單純的樹突狀細胞及未經激活的T淋巴細胞對Saos-2細胞僅有微弱的生長抑製作用.結論:臍血來源的樹突狀細胞經過熱休剋蛋白70-腫瘤抗原肽複閤物負載緻敏後,激活的細胞毒T淋巴細胞對人骨肉瘤細胞Saos-2具有極彊的殺傷能力.
목적:관찰종제혈중제취적수돌상세포부재열휴극단백70-종류항원태복합물적세포표면표형특점급기소격활적세포독T림파세포적살상활성.방법:실험우2003-10/2005-12재해방군군사의학원수의연구소완성.①제혈래원우장춘시부산의원족월순산적비고위임신산부,요구무급만성감염급혈액계통질병,산부급기가속균첨서지정동의서.열휴극단백70유본실제비순화.인골육류세포Saos-2(북경종류연구소,비호222RXB013538).②봉폐식채집제대혈,체외분리제혈단개핵세포,조정농도위1×109 L-1,접충우24공세포배양판,매공균가입100μg/L인중조립-거서세포집락자격인자、50μg/L백세포개소4、10μg/L종류배사인자α.배양14 d후,감정세포표면CD1a、HLA-DR적백분솔.③용함태우혈청적IMDM배양Saos-2골육류세포지대수생장기,이매소화후조정세포수위5×107 L-1.집전20대생장적Saos-2,동융2차,저삼진탕,리심,상청용염산조pH지7.0,과려후즉위종류항원태,여열휴극단백70체외결합.④령취제혈40 mL,분리T림파세포,유도분화지제4천,가입열휴극단백70-종류항원태100μL,촉사T림파세포활화위세포독T림파세포.⑤효응세포(세포독T림파세포)여파세포(Saos-2)안효파비50∶1,25∶1,12.5∶1,6.25∶1,3.125∶1제도,사갑기우담서염법검측세포독T림파세포살상활성.결과:①세포형태학관찰:세포인자유도후제3천,경하제혈세포정균균산포적세포취체,포체랍장;제7천가견불명현돌기;제14천출현구유전형수지상돌기적수돌상세포.②세포인자유도후제혈단핵세포표면표형감정결과:경세포인자유도후,제혈단핵세포CD1a여HLA-DR표체솔균교유도전명현승고[0,(18.43±3.26)%;(4.03±1.66)%,(59.69±8.47)%;P균＜0.01].③세포독T림파세포살상활성검측결과:배양72 h후,세포독T림파세포여파세포Saos-2효파비위50∶1시가살상결대부분종류세포,살상솔위(97.50±11.24)%,효파비종50∶1지3.125∶1가사파세포Saos-2생장정제도수도불동정도적억제.단순적수돌상세포급미경격활적T림파세포대Saos-2세포부유미약적생장억제작용.결론:제혈래원적수돌상세포경과열휴극단백70-종류항원태복합물부재치민후,격활적세포독T림파세포대인골육류세포Saos-2구유겁강적살상능력.