第二军医大学学报
第二軍醫大學學報
제이군의대학학보
ACADEMIC JOURNAL OF SECOND MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2008年
5期
546-549
,共4页
贺华%彭彪%卞留贯%孙青芳%沈建康%贺子建%林亦海
賀華%彭彪%卞留貫%孫青芳%瀋建康%賀子建%林亦海
하화%팽표%변류관%손청방%침건강%하자건%림역해
NF2%点突变%真核表达载体
NF2%點突變%真覈錶達載體
NF2%점돌변%진핵표체재체
目的:分别构建抑癌基因NF2的42位和47位点突变的2种真核表达载体,并在大鼠神经鞘瘤细胞RT4-D6P2T中诱导表达.方法:用定点突变法分别将pcDNA3.1-NF2第42位赖氨酸(Lys)突变为脯氨酸(Pro),第47位苯丙氨酸(Phe)突变为亮氨酸(Leu)构建2种NF2突变子(pcDNA3.1-NF2ΔLys42Pro和pcDNA3.1-NF2ΔPhe47Leu),将3 种NF2质粒用脂质体法分别转染RT4细胞,RT-PCR和Western印迹法分析NF2基因及蛋白表达,MTT法检测转染后RT4细胞的增殖情况.结果:测序证实定点突变成功,构建的重组真核表达载体pcDNA3.1-NF2ΔLys42Pro和pcDNA3.1-NF2ΔPhe47Leu均能表达相应的蛋白和mRNA,这2种NF2突变体对RT4细胞抑制率明显低于野生型NF2组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:成功构建了2种能够在RT4中表达的单个点突变的NF2基因真核表达载体.
目的:分彆構建抑癌基因NF2的42位和47位點突變的2種真覈錶達載體,併在大鼠神經鞘瘤細胞RT4-D6P2T中誘導錶達.方法:用定點突變法分彆將pcDNA3.1-NF2第42位賴氨痠(Lys)突變為脯氨痠(Pro),第47位苯丙氨痠(Phe)突變為亮氨痠(Leu)構建2種NF2突變子(pcDNA3.1-NF2ΔLys42Pro和pcDNA3.1-NF2ΔPhe47Leu),將3 種NF2質粒用脂質體法分彆轉染RT4細胞,RT-PCR和Western印跡法分析NF2基因及蛋白錶達,MTT法檢測轉染後RT4細胞的增殖情況.結果:測序證實定點突變成功,構建的重組真覈錶達載體pcDNA3.1-NF2ΔLys42Pro和pcDNA3.1-NF2ΔPhe47Leu均能錶達相應的蛋白和mRNA,這2種NF2突變體對RT4細胞抑製率明顯低于野生型NF2組,差異有統計學意義(P＜0.05).結論:成功構建瞭2種能夠在RT4中錶達的單箇點突變的NF2基因真覈錶達載體.
목적:분별구건억암기인NF2적42위화47위점돌변적2충진핵표체재체,병재대서신경초류세포RT4-D6P2T중유도표체.방법:용정점돌변법분별장pcDNA3.1-NF2제42위뢰안산(Lys)돌변위포안산(Pro),제47위분병안산(Phe)돌변위량안산(Leu)구건2충NF2돌변자(pcDNA3.1-NF2ΔLys42Pro화pcDNA3.1-NF2ΔPhe47Leu),장3 충NF2질립용지질체법분별전염RT4세포,RT-PCR화Western인적법분석NF2기인급단백표체,MTT법검측전염후RT4세포적증식정황.결과:측서증실정점돌변성공,구건적중조진핵표체재체pcDNA3.1-NF2ΔLys42Pro화pcDNA3.1-NF2ΔPhe47Leu균능표체상응적단백화mRNA,저2충NF2돌변체대RT4세포억제솔명현저우야생형NF2조,차이유통계학의의(P＜0.05).결론:성공구건료2충능구재RT4중표체적단개점돌변적NF2기인진핵표체재체.
