中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2008年
7期
495-499
,共5页
林欢%高宏雷%王晓艳%高玉龙%宋修庆%李术强%王笑梅
林歡%高宏雷%王曉豔%高玉龍%宋脩慶%李術彊%王笑梅
림환%고굉뢰%왕효염%고옥룡%송수경%리술강%왕소매
鸡贫血病毒%vp1基因%vp2基因%真核表达%毕赤酵母
鷄貧血病毒%vp1基因%vp2基因%真覈錶達%畢赤酵母
계빈혈병독%vp1기인%vp2기인%진핵표체%필적효모
利用特异性引物从pBluemCAV中PCR扩增得到鸡贫血病病毒(CAV)vp1、vp2基因,经EcoR Ⅰ和Not Ⅰ双酶切处理,纯化后,克隆至EcoR Ⅰ和Not Ⅰ双酶切处理的表达载体pPIC9K中,构建了真核表达质粒pPIC9K-VP1和pPIC9K-VP2.将pPIC9K-VP1和pPIC9K-VP2转化至毕赤酵母SMD1168中,在0.5%甲醇诱导下表达CAV-VP1、CAV-VP2蛋白,运用Western blot和Dot-ELISA鉴定表达蛋白.结果表明,重组酵母菌株表达出约54 ku和24 ku的目的蛋白,与针对鸡贫血病毒的单克隆抗体发生特异性反应.将表达产物乳化后免疫6周龄BALB/c小鼠,用ELISA、IFA检测免疫小鼠血清,均检测到抗体.
利用特異性引物從pBluemCAV中PCR擴增得到鷄貧血病病毒(CAV)vp1、vp2基因,經EcoR Ⅰ和Not Ⅰ雙酶切處理,純化後,剋隆至EcoR Ⅰ和Not Ⅰ雙酶切處理的錶達載體pPIC9K中,構建瞭真覈錶達質粒pPIC9K-VP1和pPIC9K-VP2.將pPIC9K-VP1和pPIC9K-VP2轉化至畢赤酵母SMD1168中,在0.5%甲醇誘導下錶達CAV-VP1、CAV-VP2蛋白,運用Western blot和Dot-ELISA鑒定錶達蛋白.結果錶明,重組酵母菌株錶達齣約54 ku和24 ku的目的蛋白,與針對鷄貧血病毒的單剋隆抗體髮生特異性反應.將錶達產物乳化後免疫6週齡BALB/c小鼠,用ELISA、IFA檢測免疫小鼠血清,均檢測到抗體.
이용특이성인물종pBluemCAV중PCR확증득도계빈혈병병독(CAV)vp1、vp2기인,경EcoR Ⅰ화Not Ⅰ쌍매절처리,순화후,극륭지EcoR Ⅰ화Not Ⅰ쌍매절처리적표체재체pPIC9K중,구건료진핵표체질립pPIC9K-VP1화pPIC9K-VP2.장pPIC9K-VP1화pPIC9K-VP2전화지필적효모SMD1168중,재0.5%갑순유도하표체CAV-VP1、CAV-VP2단백,운용Western blot화Dot-ELISA감정표체단백.결과표명,중조효모균주표체출약54 ku화24 ku적목적단백,여침대계빈혈병독적단극륭항체발생특이성반응.장표체산물유화후면역6주령BALB/c소서,용ELISA、IFA검측면역소서혈청,균검측도항체.
