化工进展
化工進展
화공진전
CHEMICAL INDUSTRY AND ENGINEERING PROGRESS
2010年
11期
2143-2148
,共6页
彭益强%庄园%林志强%黄文爱%方柏山
彭益彊%莊園%林誌彊%黃文愛%方柏山
팽익강%장완%림지강%황문애%방백산
1%3-丙二醇氧化还原酶%工程菌%辅酶再生%1%3-丙二醇
1%3-丙二醇氧化還原酶%工程菌%輔酶再生%1%3-丙二醇
1%3-병이순양화환원매%공정균%보매재생%1%3-병이순
培养定向进化后的质粒保藏菌E. coli BL21(DE3)pLysS /PET-15b-dhaT'-24 并进行质粒抽提,将抽提的质粒转化入感受态宿主细胞E. coli BL21(DE3)pLysS中得产1,3-丙二醇氧化还原酶的工程菌.工程菌经乳糖诱导后进行发酵培养获得酶活为182 U/mL的1,3-丙二醇氧化还原酶,最适反应pH值为10,pH值稳定范围为7.0～9.0,最适反应温度为55 ℃,温度稳定范围为30～45 ℃.利用工程菌产的1,3-丙二醇氧化还原酶进行转化3-羟基丙醛为1,3-丙二醇的反应,同时偶联甘油脱氢酶(由另一工程菌制备)转化甘油的反应进行辅酶NADH的再生,实现了1,3-丙二醇的双酶耦合的连续反应.由于来源于工程菌的双酶酶学性质相适应,反应连续进行34 h后,底物3-羟基丙醛的转化率达63.4%,产物1,3-丙二醇的产率达64.6%.
培養定嚮進化後的質粒保藏菌E. coli BL21(DE3)pLysS /PET-15b-dhaT'-24 併進行質粒抽提,將抽提的質粒轉化入感受態宿主細胞E. coli BL21(DE3)pLysS中得產1,3-丙二醇氧化還原酶的工程菌.工程菌經乳糖誘導後進行髮酵培養穫得酶活為182 U/mL的1,3-丙二醇氧化還原酶,最適反應pH值為10,pH值穩定範圍為7.0～9.0,最適反應溫度為55 ℃,溫度穩定範圍為30～45 ℃.利用工程菌產的1,3-丙二醇氧化還原酶進行轉化3-羥基丙醛為1,3-丙二醇的反應,同時偶聯甘油脫氫酶(由另一工程菌製備)轉化甘油的反應進行輔酶NADH的再生,實現瞭1,3-丙二醇的雙酶耦閤的連續反應.由于來源于工程菌的雙酶酶學性質相適應,反應連續進行34 h後,底物3-羥基丙醛的轉化率達63.4%,產物1,3-丙二醇的產率達64.6%.
배양정향진화후적질립보장균E. coli BL21(DE3)pLysS /PET-15b-dhaT'-24 병진행질립추제,장추제적질립전화입감수태숙주세포E. coli BL21(DE3)pLysS중득산1,3-병이순양화환원매적공정균.공정균경유당유도후진행발효배양획득매활위182 U/mL적1,3-병이순양화환원매,최괄반응pH치위10,pH치은정범위위7.0～9.0,최괄반응온도위55 ℃,온도은정범위위30～45 ℃.이용공정균산적1,3-병이순양화환원매진행전화3-간기병철위1,3-병이순적반응,동시우련감유탈경매(유령일공정균제비)전화감유적반응진행보매NADH적재생,실현료1,3-병이순적쌍매우합적련속반응.유우래원우공정균적쌍매매학성질상괄응,반응련속진행34 h후,저물3-간기병철적전화솔체63.4%,산물1,3-병이순적산솔체64.6%.
