中国海洋大学学报（自然科学版）
中國海洋大學學報（自然科學版）
중국해양대학학보（자연과학판）
PERIODICAL OF OCEAN UNIVERSITY OF CHINA
2011年
3期
37-42
,共6页
李晨%黄倢%谢国驷%赵培%王秀华
李晨%黃倢%謝國駟%趙培%王秀華
리신%황첩%사국사%조배%왕수화
基因芯片%水产病原菌%检测
基因芯片%水產病原菌%檢測
기인심편%수산병원균%검측
根据水产养殖中常见的3种病原菌鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)及迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)的研究资料,筛选3个毒力相关基因toxR、aerA、evpA设计引物和探针,构建简型基因芯片,并使用对虾白斑病综合征病毒(WSSV)variable region的PCR荧光标记产物作为表面化学质控.通过已构建和优化的多重PCR反应条件,获得了3个目的基因的PCR产物;经过芯片制作过程的优化,将探针以终浓度20μmol/L溶于50%DMSO,在室温、相对湿度45%的条件下点印于醛基基片表面.扩增的PCR产物与杂交液混合后,在42℃杂交2 h就可检测到理想的杂交信号.芯片的灵敏度试验结果表明,可以检测到的3种水产病原菌的最低模板DNA为:鳗弧菌3×102拷贝、嗜水气单胞菌5×103拷贝、迟缓爱德华氏菌6×101拷贝.该芯片可成功应用于患病大菱鲆内脏的细菌分离物的鉴定.
根據水產養殖中常見的3種病原菌鰻弧菌(Vibrio anguillarum)、嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)及遲緩愛德華氏菌(Edwardsiella tarda)的研究資料,篩選3箇毒力相關基因toxR、aerA、evpA設計引物和探針,構建簡型基因芯片,併使用對蝦白斑病綜閤徵病毒(WSSV)variable region的PCR熒光標記產物作為錶麵化學質控.通過已構建和優化的多重PCR反應條件,穫得瞭3箇目的基因的PCR產物;經過芯片製作過程的優化,將探針以終濃度20μmol/L溶于50%DMSO,在室溫、相對濕度45%的條件下點印于醛基基片錶麵.擴增的PCR產物與雜交液混閤後,在42℃雜交2 h就可檢測到理想的雜交信號.芯片的靈敏度試驗結果錶明,可以檢測到的3種水產病原菌的最低模闆DNA為:鰻弧菌3×102拷貝、嗜水氣單胞菌5×103拷貝、遲緩愛德華氏菌6×101拷貝.該芯片可成功應用于患病大蔆鲆內髒的細菌分離物的鑒定.
근거수산양식중상견적3충병원균만호균(Vibrio anguillarum)、기수기단포균(Aeromonas hydrophila)급지완애덕화씨균(Edwardsiella tarda)적연구자료,사선3개독력상관기인toxR、aerA、evpA설계인물화탐침,구건간형기인심편,병사용대하백반병종합정병독(WSSV)variable region적PCR형광표기산물작위표면화학질공.통과이구건화우화적다중PCR반응조건,획득료3개목적기인적PCR산물;경과심편제작과정적우화,장탐침이종농도20μmol/L용우50%DMSO,재실온、상대습도45%적조건하점인우철기기편표면.확증적PCR산물여잡교액혼합후,재42℃잡교2 h취가검측도이상적잡교신호.심편적령민도시험결과표명,가이검측도적3충수산병원균적최저모판DNA위:만호균3×102고패、기수기단포균5×103고패、지완애덕화씨균6×101고패.해심편가성공응용우환병대릉평내장적세균분리물적감정.
