中国老年学杂志
中國老年學雜誌
중국노년학잡지
CHINESE JOURNAL OF GERONTOLOGY
2011年
11期
2032-2034
,共3页
韩冬%徐煌%张成文%李文浩
韓鼕%徐煌%張成文%李文浩
한동%서황%장성문%리문호
Her2基因%RNA干扰%乳腺癌
Her2基因%RNA榦擾%乳腺癌
Her2기인%RNA간우%유선암
目的 构建针对HER2基因RNA干扰的真核表达载体并筛选出HER2基因的高效RNA干扰序列.方法 采用化学合成方法合成三段针对HER2基因的shRNA,通过酶切连接方法与真核表达载体pSuper/GFP/neo相连接,构建针对HER2基因的RNA干扰载体,并通过酶切和测序方法鉴定是否含有设计的shRNA.应用脂质体转染试剂分别转染载体到人乳腺癌SK-BR-3细胞中,采用实时定量PCR和Western印迹检测其对HER2基因沉默的效果.结果 EcoRⅠ和HindⅢ进行双酶切鉴定,281 bp条带出现,证明质粒中插入外源基因,再经测序证实含有设计的shRNA序列.实时定量PCR和Western印迹结果显示3段shRNA均可降低HER2 mRNA的水平并且降低跨膜蛋白HER2的表达,其中shRNA2的HER2 mRNA抑制效率最高,达到89%.结论 构建了3个真核表达载体pSuper/GFP/neo-HER2,并筛选出shRNA2这段序列,可以有效沉默人乳腺癌细胞系SK-BR-3 的HER2基因,为乳腺癌的HER2基因沉默靶向治疗奠定了基础.
目的 構建針對HER2基因RNA榦擾的真覈錶達載體併篩選齣HER2基因的高效RNA榦擾序列.方法 採用化學閤成方法閤成三段針對HER2基因的shRNA,通過酶切連接方法與真覈錶達載體pSuper/GFP/neo相連接,構建針對HER2基因的RNA榦擾載體,併通過酶切和測序方法鑒定是否含有設計的shRNA.應用脂質體轉染試劑分彆轉染載體到人乳腺癌SK-BR-3細胞中,採用實時定量PCR和Western印跡檢測其對HER2基因沉默的效果.結果 EcoRⅠ和HindⅢ進行雙酶切鑒定,281 bp條帶齣現,證明質粒中插入外源基因,再經測序證實含有設計的shRNA序列.實時定量PCR和Western印跡結果顯示3段shRNA均可降低HER2 mRNA的水平併且降低跨膜蛋白HER2的錶達,其中shRNA2的HER2 mRNA抑製效率最高,達到89%.結論 構建瞭3箇真覈錶達載體pSuper/GFP/neo-HER2,併篩選齣shRNA2這段序列,可以有效沉默人乳腺癌細胞繫SK-BR-3 的HER2基因,為乳腺癌的HER2基因沉默靶嚮治療奠定瞭基礎.
목적 구건침대HER2기인RNA간우적진핵표체재체병사선출HER2기인적고효RNA간우서렬.방법 채용화학합성방법합성삼단침대HER2기인적shRNA,통과매절련접방법여진핵표체재체pSuper/GFP/neo상련접,구건침대HER2기인적RNA간우재체,병통과매절화측서방법감정시부함유설계적shRNA.응용지질체전염시제분별전염재체도인유선암SK-BR-3세포중,채용실시정량PCR화Western인적검측기대HER2기인침묵적효과.결과 EcoRⅠ화HindⅢ진행쌍매절감정,281 bp조대출현,증명질립중삽입외원기인,재경측서증실함유설계적shRNA서렬.실시정량PCR화Western인적결과현시3단shRNA균가강저HER2 mRNA적수평병차강저과막단백HER2적표체,기중shRNA2적HER2 mRNA억제효솔최고,체도89%.결론 구건료3개진핵표체재체pSuper/GFP/neo-HER2,병사선출shRNA2저단서렬,가이유효침묵인유선암세포계SK-BR-3 적HER2기인,위유선암적HER2기인침묵파향치료전정료기출.
