中华传染病杂志
中華傳染病雜誌
중화전염병잡지
CHINESE JOURNAL OF INFECTIOUS DISEASES
2007年
2期
67-71
,共5页
林兰意%谢青%王晖%姜山%周霞秋%刘芸野%俞红%郭清%金由辛
林蘭意%謝青%王暉%薑山%週霞鞦%劉蕓野%俞紅%郭清%金由辛
림란의%사청%왕휘%강산%주하추%류예야%유홍%곽청%금유신
内质网应激%细胞凋亡%半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶%RNA干扰
內質網應激%細胞凋亡%半胱氨痠天鼕氨痠蛋白酶%RNA榦擾
내질망응격%세포조망%반광안산천동안산단백매%RNA간우
目的 构建小鼠半胱天冬氨酸蛋白酶12(Caspase-12)基因特异性小干扰RNA(siRNA)表达载体并检测其表达.方法 参照siRNA模板设计原则,设计并合成3对针对caspase12不同位点的siRNA,分别在脂质体介导下转染小鼠肝癌细胞株Hepal-6,24 h收集细胞;RT-PCR分析不同位点siRNA对靶基因mRNA表达的抑制,筛选出抑制效率最高的位点;将此位点siRNA模板序列插入质粒pRNAT-H1.1Neo中,PCR分析及基因测序进行鉴定;构建成功的重组质粒转染Hepal-6细胞48 h和72 h后,实时荧光定量PCR分析caspase-12 mRNA表达;Western印迹检测Caspase-12的表达.数据行t检验.结果 RT-PCR分析表明,第一对siRNA(siRNA*1)对caspase-12基因表达的抑制效率最高;重组质粒pRNAT H1.1Neo-caspase12(pRNAT-casp12)经PCR分析及测序表明,siRNA*1模板序列成功插入预计位点,且序列正确;pRNAT-casp12转染Hepal-6细胞48 h和72 h后,与空质粒对照组相比,caspase-12 mRNA水平分别下降72.5%和59.5%(P＜0.05);pRNAT-casp12转染后,caspase-12酶原表达量在24、48和72 h分别下调17.1%、37.3%和60.1%,48 h和72 h的抑制率比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 成功构建小鼠caspase-12特异性siRNA真核表达载体,它对小鼠肝癌细胞caspase-12基因的表达具有显著和特异的抑制作用.
目的 構建小鼠半胱天鼕氨痠蛋白酶12(Caspase-12)基因特異性小榦擾RNA(siRNA)錶達載體併檢測其錶達.方法 參照siRNA模闆設計原則,設計併閤成3對針對caspase12不同位點的siRNA,分彆在脂質體介導下轉染小鼠肝癌細胞株Hepal-6,24 h收集細胞;RT-PCR分析不同位點siRNA對靶基因mRNA錶達的抑製,篩選齣抑製效率最高的位點;將此位點siRNA模闆序列插入質粒pRNAT-H1.1Neo中,PCR分析及基因測序進行鑒定;構建成功的重組質粒轉染Hepal-6細胞48 h和72 h後,實時熒光定量PCR分析caspase-12 mRNA錶達;Western印跡檢測Caspase-12的錶達.數據行t檢驗.結果 RT-PCR分析錶明,第一對siRNA(siRNA*1)對caspase-12基因錶達的抑製效率最高;重組質粒pRNAT H1.1Neo-caspase12(pRNAT-casp12)經PCR分析及測序錶明,siRNA*1模闆序列成功插入預計位點,且序列正確;pRNAT-casp12轉染Hepal-6細胞48 h和72 h後,與空質粒對照組相比,caspase-12 mRNA水平分彆下降72.5%和59.5%(P＜0.05);pRNAT-casp12轉染後,caspase-12酶原錶達量在24、48和72 h分彆下調17.1%、37.3%和60.1%,48 h和72 h的抑製率比較,差異有統計學意義(P＜0.05).結論 成功構建小鼠caspase-12特異性siRNA真覈錶達載體,它對小鼠肝癌細胞caspase-12基因的錶達具有顯著和特異的抑製作用.
목적 구건소서반광천동안산단백매12(Caspase-12)기인특이성소간우RNA(siRNA)표체재체병검측기표체.방법 삼조siRNA모판설계원칙,설계병합성3대침대caspase12불동위점적siRNA,분별재지질체개도하전염소서간암세포주Hepal-6,24 h수집세포;RT-PCR분석불동위점siRNA대파기인mRNA표체적억제,사선출억제효솔최고적위점;장차위점siRNA모판서렬삽입질립pRNAT-H1.1Neo중,PCR분석급기인측서진행감정;구건성공적중조질립전염Hepal-6세포48 h화72 h후,실시형광정량PCR분석caspase-12 mRNA표체;Western인적검측Caspase-12적표체.수거행t검험.결과 RT-PCR분석표명,제일대siRNA(siRNA*1)대caspase-12기인표체적억제효솔최고;중조질립pRNAT H1.1Neo-caspase12(pRNAT-casp12)경PCR분석급측서표명,siRNA*1모판서렬성공삽입예계위점,차서렬정학;pRNAT-casp12전염Hepal-6세포48 h화72 h후,여공질립대조조상비,caspase-12 mRNA수평분별하강72.5%화59.5%(P＜0.05);pRNAT-casp12전염후,caspase-12매원표체량재24、48화72 h분별하조17.1%、37.3%화60.1%,48 h화72 h적억제솔비교,차이유통계학의의(P＜0.05).결론 성공구건소서caspase-12특이성siRNA진핵표체재체,타대소서간암세포caspase-12기인적표체구유현저화특이적억제작용.
