眼视光学杂志
眼視光學雜誌
안시광학잡지
CHINESE JOURNAL OF OPTOMEY & OPHTHALMOLOGY
2009年
4期
265-268
,共4页
张美霞%吴静%辛梅%张军军%闫乃红%严密
張美霞%吳靜%辛梅%張軍軍%閆迺紅%嚴密
장미하%오정%신매%장군군%염내홍%엄밀
视网膜色素%上皮细胞%腺病毒%内皮抑素类%感染
視網膜色素%上皮細胞%腺病毒%內皮抑素類%感染
시망막색소%상피세포%선병독%내피억소류%감염
目的 探讨以腺病毒为载体对体外培养的人视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelial,hRPE)细胞进行人内皮抑素(human endostatin,hES)感染,获得高效表达hES转基因细胞的可行性.方法 常规培养hRPE细胞,传代至第3～第5代后,应用携带有绿色荧光蛋白(green fluores-cent protein,GFP)的hES重组腺病毒按感染复数30进行感染.培养24 h后,在荧光显微镜下计数培养的hRPE细胞的GFP表达阳性率;用免疫组织化学法观察hES在已感染hRPE细胞中的表达情况;提取hRPE细胞总RNA,采用RT-PCR技术对产物行琼脂糖凝胶电泳;用Western blot法检测感染hRPE细胞培养上清液中hES的表达水平.结果 hES重组腺病毒感染后,hRPE细胞形态正常.感染后24 h,GFP即呈100%表达,弥漫整个胞质;免疫组织化学法观察可见,hRPE细胞浆内呈棕黄色的阳性反应,而在感染空载腺病毒的对照组中细胞胞浆无染色;RT-PCR反应可见,细胞裂解产物中有hES阳性条带;Western blot法检测结果 表明,培养上清液中有hES蛋白的表达.结论 hES重组腺病毒载体能有效感染体外培养的hRPE细胞,并稳定表达hES蛋白.
目的 探討以腺病毒為載體對體外培養的人視網膜色素上皮(human retinal pigment epithelial,hRPE)細胞進行人內皮抑素(human endostatin,hES)感染,穫得高效錶達hES轉基因細胞的可行性.方法 常規培養hRPE細胞,傳代至第3～第5代後,應用攜帶有綠色熒光蛋白(green fluores-cent protein,GFP)的hES重組腺病毒按感染複數30進行感染.培養24 h後,在熒光顯微鏡下計數培養的hRPE細胞的GFP錶達暘性率;用免疫組織化學法觀察hES在已感染hRPE細胞中的錶達情況;提取hRPE細胞總RNA,採用RT-PCR技術對產物行瓊脂糖凝膠電泳;用Western blot法檢測感染hRPE細胞培養上清液中hES的錶達水平.結果 hES重組腺病毒感染後,hRPE細胞形態正常.感染後24 h,GFP即呈100%錶達,瀰漫整箇胞質;免疫組織化學法觀察可見,hRPE細胞漿內呈棕黃色的暘性反應,而在感染空載腺病毒的對照組中細胞胞漿無染色;RT-PCR反應可見,細胞裂解產物中有hES暘性條帶;Western blot法檢測結果 錶明,培養上清液中有hES蛋白的錶達.結論 hES重組腺病毒載體能有效感染體外培養的hRPE細胞,併穩定錶達hES蛋白.
목적 탐토이선병독위재체대체외배양적인시망막색소상피(human retinal pigment epithelial,hRPE)세포진행인내피억소(human endostatin,hES)감염,획득고효표체hES전기인세포적가행성.방법 상규배양hRPE세포,전대지제3～제5대후,응용휴대유록색형광단백(green fluores-cent protein,GFP)적hES중조선병독안감염복수30진행감염.배양24 h후,재형광현미경하계수배양적hRPE세포적GFP표체양성솔;용면역조직화학법관찰hES재이감염hRPE세포중적표체정황;제취hRPE세포총RNA,채용RT-PCR기술대산물행경지당응효전영;용Western blot법검측감염hRPE세포배양상청액중hES적표체수평.결과 hES중조선병독감염후,hRPE세포형태정상.감염후24 h,GFP즉정100%표체,미만정개포질;면역조직화학법관찰가견,hRPE세포장내정종황색적양성반응,이재감염공재선병독적대조조중세포포장무염색;RT-PCR반응가견,세포렬해산물중유hES양성조대;Western blot법검측결과 표명,배양상청액중유hES단백적표체.결론 hES중조선병독재체능유효감염체외배양적hRPE세포,병은정표체hES단백.
