CAJ | 학술논문

目的探讨用RNA干扰技术下调血管内皮生长因子(VEGF)基因表达对白血病细胞生长的影响.方法设计3段分别针对VEGF第3～5外显子的短发夹状RNA(shRNA)并构建其表达载体,分别转染人白血病细胞株NB4,用实时定量PCR及Western blot方法观察3段shRNA对细胞内VEGF基因表达的影响.抗性筛选稳定抑制VEGF表达的永久细胞克隆,应用MTT法、甲基纤维素半固体培养法及细胞周期动力学检测了解VEGF基因缄默对白血病细胞生长的影响.结果成功构建分别携带3段shRNA及对照随机片段的重组质粒pGenesil-VR1,2,3和pGenesil-con,3种shRNA重组质粒中pGenesil-VR3可明显降低细胞内VEGF mRNA的丰度及VEGF蛋白表达,筛选出的NB4-VR3细胞株增殖能力明显下降,细胞集落形成率为(13.3±3.8)%,与NB4-con的(21.3±6.4)%和NB4组的(24.5±5.2)%相比,差异有统计学意义(P＜0.05),细胞周期阻滞于G1期,3组细胞G1期比例分别为(53.2±4.6)%、(42.7±5.9)%和(40.5±5.3)%.结论应用RNA干扰技术能筛选出特异而高效阻断VEGF基因表达及功能的shRNA,VEGF基因表达下调能明显抑制白血病细胞生长.
목적탐토용RNA간우기술하조혈관내피생장인자(VEGF)기인표체대백혈병세포생장적영향.방법설계3단분별침대VEGF제3～5외현자적단발협상RNA(shRNA)병구건기표체재체,분별전염인백혈병세포주NB4,용실시정량PCR급Western blot방법관찰3단shRNA대세포내VEGF기인표체적영향.항성사선은정억제VEGF표체적영구세포극륭,응용MTT법、갑기섬유소반고체배양법급세포주기동역학검측료해VEGF기인함묵대백혈병세포생장적영향.결과성공구건분별휴대3단shRNA급대조수궤편단적중조질립pGenesil-VR1,2,3화pGenesil-con,3충shRNA중조질립중pGenesil-VR3가명현강저세포내VEGF mRNA적봉도급VEGF단백표체,사선출적NB4-VR3세포주증식능력명현하강,세포집락형성솔위(13.3±3.8)%,여NB4-con적(21.3±6.4)%화NB4조적(24.5±5.2)%상비,차이유통계학의의(P＜0.05),세포주기조체우G1기,3조세포G1기비례분별위(53.2±4.6)%、(42.7±5.9)%화(40.5±5.3)%.결론응용RNA간우기술능사선출특이이고효조단VEGF기인표체급공능적shRNA,VEGF기인표체하조능명현억제백혈병세포생장.