CAJ | 학술논문

目的建立荧光定量RT-PCR法检测白血病融合基因bcr/abl mRNA的方法,为白血病临床诊断及微量残留病监测提供有用工具.方法 RT-PCR扩增培养的K562细胞bcr/abl融合基因,A-T载体克隆法构建定量标准模板,用PE7700型检测仪,建立荧光定量RT-PCR方法,对方法的灵敏性、稳定性、重复性进行测定;定量检测14例慢性髓细胞白血病(CML)患者和4例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者外周血样本.结果建立的荧光定量RT-PCR方法,可检测出约10-5μg K562总RNA中的 bcr/abl融合基因和10个bcr/abl重组质粒拷贝,重复性的CT值(Cyclethreshold)管间、批间变异系数(CV)分别为:2.0%,3.7%.14例CML患者bcr/abl融合基因表达量中位数为5.15×104拷贝/μg RNA,产物经电泳分析,其中11例为b2a2,3例为b3a2,1例12×104拷贝/μgRNA的CML患者,骨髓移植后1个月变为0.23×104拷贝/μg RNA.4例ALL患者中1例有bcr/abl融合基因的表达,为b2a2,表达量为8.2×105拷贝/μg RNA.结论建立的荧光定量RT-PCR方法灵敏、特异、重复性好,结果用拷贝数表示,准确可靠,利于统一标准.该方法能检测出b2a2、b3a2两种类型的融合基因,可广泛用于CML的诊断和微量残留病的检测.
목적건립형광정량RT-PCR법검측백혈병융합기인bcr/abl mRNA적방법,위백혈병림상진단급미량잔류병감측제공유용공구.방법 RT-PCR확증배양적K562세포bcr/abl융합기인,A-T재체극륭법구건정량표준모판,용PE7700형검측의,건립형광정량RT-PCR방법,대방법적령민성、은정성、중복성진행측정;정량검측14례만성수세포백혈병(CML)환자화4례급성림파세포백혈병(ALL)환자외주혈양본.결과건립적형광정량RT-PCR방법,가검측출약10-5μg K562총RNA중적 bcr/abl융합기인화10개bcr/abl중조질립고패,중복성적CT치(Cyclethreshold)관간、비간변이계수(CV)분별위:2.0%,3.7%.14례CML환자bcr/abl융합기인표체량중위수위5.15×104고패/μg RNA,산물경전영분석,기중11례위b2a2,3례위b3a2,1례12×104고패/μgRNA적CML환자,골수이식후1개월변위0.23×104고패/μg RNA.4례ALL환자중1례유bcr/abl융합기인적표체,위b2a2,표체량위8.2×105고패/μg RNA.결론건립적형광정량RT-PCR방법령민、특이、중복성호,결과용고패수표시,준학가고,리우통일표준.해방법능검측출b2a2、b3a2량충류형적융합기인,가엄범용우CML적진단화미량잔류병적검측.