CAJ | 학술논문

目的构建结核分枝杆菌抗原ESAT-6的真核表达质粒,并研究其免疫原性.方法采用聚合酶链反应(PCR)方法自结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增esat-6基因片段,定向亚克隆入真核表达载体pVAC,构建pVAC-esat-6重组质粒;利用脂质体介导的转染技术,将其导入Vero E6细胞,RT-PCR法检测mRNA表达情况,Western-blot法鉴定表达产物;重组质粒经基因枪免疫小鼠后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清抗ESAT-6特异性抗体以及小鼠脾淋巴细胞培养上清液干扰素-γ(IFN-γ)含量.结果成功构建了真核表达重组质粒pVAC-esat-6,并可在VeroE6细胞中表达;重组质粒免疫小鼠3次后,抗体滴度达到了1:1600,重组质粒组(pVAC-esat-6组)小鼠脾淋巴细胞培养上清液IFN-γ水平明显高于对照组(pVAC组)(P＜0.01).结论成功构建结核分枝杆菌抗原ESAT-6的真核表达质粒pVAC-esat-6,免疫小鼠后诱导产生了特异的体液免疫应答和细胞免疫应答.
목적구건결핵분지간균항원ESAT-6적진핵표체질립,병연구기면역원성.방법채용취합매련반응(PCR)방법자결핵분지간균H37Rv기인조DNA중확증esat-6기인편단,정향아극륭입진핵표체재체pVAC,구건pVAC-esat-6중조질립;이용지질체개도적전염기술,장기도입Vero E6세포,RT-PCR법검측mRNA표체정황,Western-blot법감정표체산물;중조질립경기인창면역소서후,채용매련면역흡부시험(ELISA)검측소서혈청항ESAT-6특이성항체이급소서비림파세포배양상청액간우소-γ(IFN-γ)함량.결과성공구건료진핵표체중조질립pVAC-esat-6,병가재VeroE6세포중표체;중조질립면역소서3차후,항체적도체도료1:1600,중조질립조(pVAC-esat-6조)소서비림파세포배양상청액IFN-γ수평명현고우대조조(pVAC조)(P＜0.01).결론성공구건결핵분지간균항원ESAT-6적진핵표체질립pVAC-esat-6,면역소서후유도산생료특이적체액면역응답화세포면역응답.