天津医药
天津醫藥
천진의약
TIANJIN MEDICAL JOURNAL
2012年
5期
480-482,后插3
,共4页
张金晓%张瑞%汪蓓蕾%郭刚
張金曉%張瑞%汪蓓蕾%郭剛
장금효%장서%왕배뢰%곽강
端粒,末端转移酶%基因,bcl-2%转染%HeLa细胞%shRNA
耑粒,末耑轉移酶%基因,bcl-2%轉染%HeLa細胞%shRNA
단립,말단전이매%기인,bcl-2%전염%HeLa세포%shRNA
目的:研究双启动子shRNA表达载体对人端粒酶蛋白催化亚单位(hTERT)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)基因表达的抑制作用.方法:分别从构建好的大肠杆菌DH5α菌体中提取含有双启动子shRNA的表达载体pdPRO-TB、单启动子对照pdPRO-T、pdPRO-B和阴性对照质粒pdPRO,通过脂质体介导瞬时转染Hela细胞,倒置显微镜下观察细胞形态.实时荧光定量RCR检测hTERT和bcl-2基因的表达水平.结果:4种菌体中均提取出5 000 bp左右的质粒,分别转染Hela细胞48 h后,可见转染pdPRO的Hela细胞形态无明显变化,转染pdPRO-T和pdPRO-B的Hela细胞有部分悬浮,转染pdPRO-TB的Hela细胞有大量悬浮.各载体质粒构建均成功,各目的基因相对管家基因的含量:T(hTERT)=39.8％,B(hTERT)=107.9％,TB(hTERT) =32.1％;T(bcl-2)=91.4％,B(bcl-2)=35.4％,TB(bcl-2)=31.4％.结论:双启动子shRNA表达载体构建成功,可同时抑制hTERT和bcl-2基因的表达.
目的:研究雙啟動子shRNA錶達載體對人耑粒酶蛋白催化亞單位(hTERT)和B細胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)基因錶達的抑製作用.方法:分彆從構建好的大腸桿菌DH5α菌體中提取含有雙啟動子shRNA的錶達載體pdPRO-TB、單啟動子對照pdPRO-T、pdPRO-B和陰性對照質粒pdPRO,通過脂質體介導瞬時轉染Hela細胞,倒置顯微鏡下觀察細胞形態.實時熒光定量RCR檢測hTERT和bcl-2基因的錶達水平.結果:4種菌體中均提取齣5 000 bp左右的質粒,分彆轉染Hela細胞48 h後,可見轉染pdPRO的Hela細胞形態無明顯變化,轉染pdPRO-T和pdPRO-B的Hela細胞有部分懸浮,轉染pdPRO-TB的Hela細胞有大量懸浮.各載體質粒構建均成功,各目的基因相對管傢基因的含量:T(hTERT)=39.8％,B(hTERT)=107.9％,TB(hTERT) =32.1％;T(bcl-2)=91.4％,B(bcl-2)=35.4％,TB(bcl-2)=31.4％.結論:雙啟動子shRNA錶達載體構建成功,可同時抑製hTERT和bcl-2基因的錶達.
목적:연구쌍계동자shRNA표체재체대인단립매단백최화아단위(hTERT)화B세포림파류/백혈병-2(bcl-2)기인표체적억제작용.방법:분별종구건호적대장간균DH5α균체중제취함유쌍계동자shRNA적표체재체pdPRO-TB、단계동자대조pdPRO-T、pdPRO-B화음성대조질립pdPRO,통과지질체개도순시전염Hela세포,도치현미경하관찰세포형태.실시형광정량RCR검측hTERT화bcl-2기인적표체수평.결과:4충균체중균제취출5 000 bp좌우적질립,분별전염Hela세포48 h후,가견전염pdPRO적Hela세포형태무명현변화,전염pdPRO-T화pdPRO-B적Hela세포유부분현부,전염pdPRO-TB적Hela세포유대량현부.각재체질립구건균성공,각목적기인상대관가기인적함량:T(hTERT)=39.8％,B(hTERT)=107.9％,TB(hTERT) =32.1％;T(bcl-2)=91.4％,B(bcl-2)=35.4％,TB(bcl-2)=31.4％.결론:쌍계동자shRNA표체재체구건성공,가동시억제hTERT화bcl-2기인적표체.
