CAJ | 학술논문

本研究通过Cre-loxP系统,构建了Kan基因的删除载体系统,利用花青素合成途径中转录因子的表达指示删除的效果.首先,利用两次PCR方法对pGreen载体进行改造,在卡那霉素抗性(Kan)基因的两侧加入两个同向的loxP位点,在多克隆位点前插入5-烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸(EPSP)合酶的表达框作为筛选标记基因,命名为pBAC823.在此载体基础上,构建了两个植物表达载体,组成一个抗生素可删除的载体系统.其一是在pBAC823载体Kan基因的一侧加入花青素合成途径中两个转录因子bi基因和cl基因的表达框,命名为pBAC9008.该载体可以作为基础植物表达载体,用于表达目的基因.其二是含Cre酶基因表达框的植物表达载体.将hsp70启动子驱动的cre基因的表达框插入pBAC823载体Kan基因的一侧,并将玉米花青素基因合成途径中转录因子bi和cl的表达框插入多克隆位点,命名为pBAC9009,此载体作为一个删除载体,单独转化植物,之后可以通过杂交方法删除目的基因表达载体中两个loxP位点之间的Kan基因片段.将上述载体转化玉米幼胚,得到T0代转基因玉米的种子,其中部分籽粒为紫色,分子检测结果表明紫色籽粒有花青素基因的插入,验证了花青素合成基因作为可视化标记的可靠性.本研究采用了可视化标记跟踪外源基因的表达和抗生素抗性基因的删除,不仅大大降低了外源基因的检测成本,为转基因食品安全提供技术保证,在转基因研究中具有重要的意义.
본연구통과Cre-loxP계통,구건료Kan기인적산제재체계통,이용화청소합성도경중전록인자적표체지시산제적효과.수선,이용량차PCR방법대pGreen재체진행개조,재잡나매소항성(Kan)기인적량측가입량개동향적loxP위점,재다극륭위점전삽입5-희순식병동산망초산-3-린산(EPSP)합매적표체광작위사선표기기인,명명위pBAC823.재차재체기출상,구건료량개식물표체재체,조성일개항생소가산제적재체계통.기일시재pBAC823재체Kan기인적일측가입화청소합성도경중량개전록인자bi기인화cl기인적표체광,명명위pBAC9008.해재체가이작위기출식물표체재체,용우표체목적기인.기이시함Cre매기인표체광적식물표체재체.장hsp70계동자구동적cre기인적표체광삽입pBAC823재체Kan기인적일측,병장옥미화청소기인합성도경중전록인자bi화cl적표체광삽입다극륭위점,명명위pBAC9009,차재체작위일개산제재체,단독전화식물,지후가이통과잡교방법산제목적기인표체재체중량개loxP위점지간적Kan기인편단.장상술재체전화옥미유배,득도T0대전기인옥미적충자,기중부분자립위자색,분자검측결과표명자색자립유화청소기인적삽입,험증료화청소합성기인작위가시화표기적가고성.본연구채용료가시화표기근종외원기인적표체화항생소항성기인적산제,불부대대강저료외원기인적검측성본,위전기인식품안전제공기술보증,재전기인연구중구유중요적의의.