河南农业科学
河南農業科學
하남농업과학
JOURNAL OF HENAN AGRICULTURAL SCIENCES
2012年
4期
86-89
,共4页
乔贞贞%秦艳红%乔奇%张德胜%田雨婷%高洁%张振臣
喬貞貞%秦豔紅%喬奇%張德勝%田雨婷%高潔%張振臣
교정정%진염홍%교기%장덕성%전우정%고길%장진신
甘薯卷叶病毒%基因组序列%外壳蛋白基因%原核表达
甘藷捲葉病毒%基因組序列%外殼蛋白基因%原覈錶達
감서권협병독%기인조서렬%외각단백기인%원핵표체
为了制备甘薯卷叶病毒(SPLCV)的特异性抗体,克隆了甘薯卷叶病毒江苏分离物SPLCV(JS:XZ:3-2)的全长基因,并对其基因结构及分子变异情况进行分析,同时对外壳蛋白(CP)基因进行了克隆和表达.利用PCR方法扩增并克隆了SPLCV(JS:XZ:3-2)的全基因组,测序分析表明,SPLCV(JS:XZ:3-2)基因组全长为2 834 bp,含有6个开放阅读框架,与已发表的SPLCV其他分离物相比,全基因组核苷酸序列相似性为82.7％～94.4％.其中,CP基因由765个核苷酸组成,共编码254个氨基酸残基.SPLCV CP基因核苷酸序列与其他分离物的相似性在89.2％～90.6％,其中与SPLCV美国分离物(HQ333135)的相似性最高,为90.6％；与日本分离物(AB433788)的相似性最低,为89.2％；与中国大陆分离物(FJ515896)CP基因的核苷酸序列相似性为90.2％.将SPLCV CP基因克隆到原核表达载体pGEX - 4T-3上,获得重组质粒,经IPTG诱导表达、SDS - PAGE分析得到了大小约为54.3 kD的融合蛋白条带,说明CP基因在大肠杆菌中得到了高效表达.
為瞭製備甘藷捲葉病毒(SPLCV)的特異性抗體,剋隆瞭甘藷捲葉病毒江囌分離物SPLCV(JS:XZ:3-2)的全長基因,併對其基因結構及分子變異情況進行分析,同時對外殼蛋白(CP)基因進行瞭剋隆和錶達.利用PCR方法擴增併剋隆瞭SPLCV(JS:XZ:3-2)的全基因組,測序分析錶明,SPLCV(JS:XZ:3-2)基因組全長為2 834 bp,含有6箇開放閱讀框架,與已髮錶的SPLCV其他分離物相比,全基因組覈苷痠序列相似性為82.7％～94.4％.其中,CP基因由765箇覈苷痠組成,共編碼254箇氨基痠殘基.SPLCV CP基因覈苷痠序列與其他分離物的相似性在89.2％～90.6％,其中與SPLCV美國分離物(HQ333135)的相似性最高,為90.6％；與日本分離物(AB433788)的相似性最低,為89.2％；與中國大陸分離物(FJ515896)CP基因的覈苷痠序列相似性為90.2％.將SPLCV CP基因剋隆到原覈錶達載體pGEX - 4T-3上,穫得重組質粒,經IPTG誘導錶達、SDS - PAGE分析得到瞭大小約為54.3 kD的融閤蛋白條帶,說明CP基因在大腸桿菌中得到瞭高效錶達.
위료제비감서권협병독(SPLCV)적특이성항체,극륭료감서권협병독강소분리물SPLCV(JS:XZ:3-2)적전장기인,병대기기인결구급분자변이정황진행분석,동시대외각단백(CP)기인진행료극륭화표체.이용PCR방법확증병극륭료SPLCV(JS:XZ:3-2)적전기인조,측서분석표명,SPLCV(JS:XZ:3-2)기인조전장위2 834 bp,함유6개개방열독광가,여이발표적SPLCV기타분리물상비,전기인조핵감산서렬상사성위82.7％～94.4％.기중,CP기인유765개핵감산조성,공편마254개안기산잔기.SPLCV CP기인핵감산서렬여기타분리물적상사성재89.2％～90.6％,기중여SPLCV미국분리물(HQ333135)적상사성최고,위90.6％；여일본분리물(AB433788)적상사성최저,위89.2％；여중국대륙분리물(FJ515896)CP기인적핵감산서렬상사성위90.2％.장SPLCV CP기인극륭도원핵표체재체pGEX - 4T-3상,획득중조질립,경IPTG유도표체、SDS - PAGE분석득도료대소약위54.3 kD적융합단백조대,설명CP기인재대장간균중득도료고효표체.
