浙江理工大学学报
浙江理工大學學報
절강리공대학학보
JOURNAL OF ZHEJIANG SCI-TECH UNIVERSITY
2012年
4期
584-588
,共5页
梁天祥%谌贺宽子%陈磊%武虎%唐斌
樑天祥%諶賀寬子%陳磊%武虎%唐斌
량천상%심하관자%진뢰%무호%당빈
TSP-1%sCAR-TSP-1融合蛋白%原核表达%白血病细胞
TSP-1%sCAR-TSP-1融閤蛋白%原覈錶達%白血病細胞
TSP-1%sCAR-TSP-1융합단백%원핵표체%백혈병세포
根据thrombospondin-1( TSP-1)氨基酸序列(RFYVVMWK),以已有的腺病毒受体sCAR为模板,将8个氨基酸对应基因核苷酸通过PCR扩增于sCAR之后,得到sCAR-TSP-1,连接到表达载体pQE30上,转化大肠杆菌M15后获得工程茵.该菌株经IPTG诱导后,高效表达出带有组氨酸标签以包涵体形式存在的融合蛋白；sARTSP-1.包涵体经过尿素变性溶解、PBS稀释复性、Ni离子亲和层析柱纯化,获得目的蛋白.SDS-PAGE分析表明,有一条明显的特异性蛋白条带.同时细胞实验结果表明融合蛋白sCAR-TSP-1对白血病细胞K562有明显凋亡作用.
根據thrombospondin-1( TSP-1)氨基痠序列(RFYVVMWK),以已有的腺病毒受體sCAR為模闆,將8箇氨基痠對應基因覈苷痠通過PCR擴增于sCAR之後,得到sCAR-TSP-1,連接到錶達載體pQE30上,轉化大腸桿菌M15後穫得工程茵.該菌株經IPTG誘導後,高效錶達齣帶有組氨痠標籤以包涵體形式存在的融閤蛋白；sARTSP-1.包涵體經過尿素變性溶解、PBS稀釋複性、Ni離子親和層析柱純化,穫得目的蛋白.SDS-PAGE分析錶明,有一條明顯的特異性蛋白條帶.同時細胞實驗結果錶明融閤蛋白sCAR-TSP-1對白血病細胞K562有明顯凋亡作用.
근거thrombospondin-1( TSP-1)안기산서렬(RFYVVMWK),이이유적선병독수체sCAR위모판,장8개안기산대응기인핵감산통과PCR확증우sCAR지후,득도sCAR-TSP-1,련접도표체재체pQE30상,전화대장간균M15후획득공정인.해균주경IPTG유도후,고효표체출대유조안산표첨이포함체형식존재적융합단백；sARTSP-1.포함체경과뇨소변성용해、PBS희석복성、Ni리자친화층석주순화,획득목적단백.SDS-PAGE분석표명,유일조명현적특이성단백조대.동시세포실험결과표명융합단백sCAR-TSP-1대백혈병세포K562유명현조망작용.
