重庆医科大学学报
重慶醫科大學學報
중경의과대학학보
UNIVERSITATIS SCIENTIAE MEDICINAE CHONGQING
2009年
8期
1060-1062
,共3页
徐远久%熊异平%吴建敏%陈仕银%夏洪安%郑爱华%徐海波
徐遠久%熊異平%吳建敏%陳仕銀%夏洪安%鄭愛華%徐海波
서원구%웅이평%오건민%진사은%하홍안%정애화%서해파
H2B基因%绿色荧光蛋白%HEK293细胞%染色体分离
H2B基因%綠色熒光蛋白%HEK293細胞%染色體分離
H2B기인%록색형광단백%HEK293세포%염색체분리
目的:构建人H2B基因与GFP融合的绿色荧光蛋白真核表达质粒,并在HEK293细胞中表达.方法:通过RT-PCR从HEK293细胞总RNA中扩增获得H2B基因的部分cDNA序列,与载体pEGFP-C1连接构建H2B基因与GFP融合表达的真核表达质粒pEGFP/H2B,经酶切和测序鉴定;应用脂质体转染技术将重组质粒转染HEK293细胞观察融合蛋白的表达.结果:成功构建H2B基因与GFP融合的绿色荧光蛋白真核表达载体,与对照组中转染空载体pEGFP-C1的HEK293细胞中的弥漫荧光相比,转染重组质粒的细胞中可观察到绿色荧光蛋白集中表达在细胞核内,分裂期细胞中可见与染色体形态一致的绿色荧光.结论:该载体的成功构建为研究染色体的分离机制建立了有效的观察体系.
目的:構建人H2B基因與GFP融閤的綠色熒光蛋白真覈錶達質粒,併在HEK293細胞中錶達.方法:通過RT-PCR從HEK293細胞總RNA中擴增穫得H2B基因的部分cDNA序列,與載體pEGFP-C1連接構建H2B基因與GFP融閤錶達的真覈錶達質粒pEGFP/H2B,經酶切和測序鑒定;應用脂質體轉染技術將重組質粒轉染HEK293細胞觀察融閤蛋白的錶達.結果:成功構建H2B基因與GFP融閤的綠色熒光蛋白真覈錶達載體,與對照組中轉染空載體pEGFP-C1的HEK293細胞中的瀰漫熒光相比,轉染重組質粒的細胞中可觀察到綠色熒光蛋白集中錶達在細胞覈內,分裂期細胞中可見與染色體形態一緻的綠色熒光.結論:該載體的成功構建為研究染色體的分離機製建立瞭有效的觀察體繫.
목적:구건인H2B기인여GFP융합적록색형광단백진핵표체질립,병재HEK293세포중표체.방법:통과RT-PCR종HEK293세포총RNA중확증획득H2B기인적부분cDNA서렬,여재체pEGFP-C1련접구건H2B기인여GFP융합표체적진핵표체질립pEGFP/H2B,경매절화측서감정;응용지질체전염기술장중조질립전염HEK293세포관찰융합단백적표체.결과:성공구건H2B기인여GFP융합적록색형광단백진핵표체재체,여대조조중전염공재체pEGFP-C1적HEK293세포중적미만형광상비,전염중조질립적세포중가관찰도록색형광단백집중표체재세포핵내,분렬기세포중가견여염색체형태일치적록색형광.결론:해재체적성공구건위연구염색체적분리궤제건립료유효적관찰체계.
