中国动物检疫
中國動物檢疫
중국동물검역
CHINA ANMAL QUARANTINE
2011年
3期
41-45,51
,共6页
孙涛%徐彪%朱来华%张太翔%梁成珠%凌宗帅%岳志芹
孫濤%徐彪%硃來華%張太翔%樑成珠%凌宗帥%嶽誌芹
손도%서표%주래화%장태상%량성주%릉종수%악지근
禽流感病毒%新城疫病毒%多重RT-PCR%变性高效液相色谱
禽流感病毒%新城疫病毒%多重RT-PCR%變性高效液相色譜
금류감병독%신성역병독%다중RT-PCR%변성고효액상색보
应用多重RT-PCR反应(mRT-PCR)结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术建立禽产品中禽流感病毒和新城疫病毒的快速检测方法.以禽流感病毒NP基因和新城疫病毒F基因各设计1对引物,经优化单相RT-PCR(sRT-PCR )反应体系,建立多重RT-PCR(mRT-PCR)同时检测禽流感和新城疫,其PCR扩增产物经DHPLC技术进行快速检测分析后,检测极限分别达10-0.5ELD50/0.1mL和10-1.5ELD50/0.1mL.与普通凝胶电泳比较,敏感性高2个数量级.特异性试验表明,mRT-PCR-DHPLC仅检测到禽流感病毒与新城疫病毒,而对其他5种禽类病原体和SPF鸡胚尿囊液均未检测到阳性吸收峰.所建立的方法检测不同亚型禽流感病毒29株、不同来源及不同毒力的新城疫病毒16株,结果与实时荧光定量PCR检测结果完全一致;与病原分离法同时检测人工感染鸡的组织脏器,两种方法检测禽流感的符合率为94.40/o(34/36),检测新城疫的符合率为95.4%(21/22).病原分离法的检出率虽高于DHPLC方法,但经统计学分析两者差异不显著,两种方法同时对27份进口鸡脸样品与90份棉拭子样品进行检测,阴性符合率为100%,可适用于进出口禽肉产品的检测.
應用多重RT-PCR反應(mRT-PCR)結閤變性高效液相色譜(DHPLC)技術建立禽產品中禽流感病毒和新城疫病毒的快速檢測方法.以禽流感病毒NP基因和新城疫病毒F基因各設計1對引物,經優化單相RT-PCR(sRT-PCR )反應體繫,建立多重RT-PCR(mRT-PCR)同時檢測禽流感和新城疫,其PCR擴增產物經DHPLC技術進行快速檢測分析後,檢測極限分彆達10-0.5ELD50/0.1mL和10-1.5ELD50/0.1mL.與普通凝膠電泳比較,敏感性高2箇數量級.特異性試驗錶明,mRT-PCR-DHPLC僅檢測到禽流感病毒與新城疫病毒,而對其他5種禽類病原體和SPF鷄胚尿囊液均未檢測到暘性吸收峰.所建立的方法檢測不同亞型禽流感病毒29株、不同來源及不同毒力的新城疫病毒16株,結果與實時熒光定量PCR檢測結果完全一緻;與病原分離法同時檢測人工感染鷄的組織髒器,兩種方法檢測禽流感的符閤率為94.40/o(34/36),檢測新城疫的符閤率為95.4%(21/22).病原分離法的檢齣率雖高于DHPLC方法,但經統計學分析兩者差異不顯著,兩種方法同時對27份進口鷄臉樣品與90份棉拭子樣品進行檢測,陰性符閤率為100%,可適用于進齣口禽肉產品的檢測.
응용다중RT-PCR반응(mRT-PCR)결합변성고효액상색보(DHPLC)기술건립금산품중금류감병독화신성역병독적쾌속검측방법.이금류감병독NP기인화신성역병독F기인각설계1대인물,경우화단상RT-PCR(sRT-PCR )반응체계,건립다중RT-PCR(mRT-PCR)동시검측금류감화신성역,기PCR확증산물경DHPLC기술진행쾌속검측분석후,검측겁한분별체10-0.5ELD50/0.1mL화10-1.5ELD50/0.1mL.여보통응효전영비교,민감성고2개수량급.특이성시험표명,mRT-PCR-DHPLC부검측도금류감병독여신성역병독,이대기타5충금류병원체화SPF계배뇨낭액균미검측도양성흡수봉.소건립적방법검측불동아형금류감병독29주、불동래원급불동독력적신성역병독16주,결과여실시형광정량PCR검측결과완전일치;여병원분리법동시검측인공감염계적조직장기,량충방법검측금류감적부합솔위94.40/o(34/36),검측신성역적부합솔위95.4%(21/22).병원분리법적검출솔수고우DHPLC방법,단경통계학분석량자차이불현저,량충방법동시대27빈진구계검양품여90빈면식자양품진행검측,음성부합솔위100%,가괄용우진출구금육산품적검측.
