中国比较医学杂志
中國比較醫學雜誌
중국비교의학잡지
CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE
2011年
1期
48-53
,共6页
雷小春%刘田福%司苏晋%薛亮亮%张引红
雷小春%劉田福%司囌晉%薛亮亮%張引紅
뢰소춘%류전복%사소진%설량량%장인홍
甘丙肽%重叠延伸PCR%血小板源性生长因子启动子%转基因载体
甘丙肽%重疊延伸PCR%血小闆源性生長因子啟動子%轉基因載體
감병태%중첩연신PCR%혈소판원성생장인자계동자%전기인재체
目的 克隆甘丙肽重构基因GAL(intronⅡ),构建小鼠神经系统特异性表达甘丙肽(galanin,GAL)的转基因载体pUC18/PDGF-β-promoter/GAL(intronⅡ),为制备GAL转基因小鼠做准备.方法 通过常规PCR、RT-PCR及重叠延伸PCR(overlap extension PCR,OE-PCR)扩增出插入GAL第二内含子的GAL全长cDNA的重构基因GAL(intronⅡ),将GAL(intronⅡ)克隆入T载体进行酶切、测序鉴定;同时从psisCAT6α中切下血小板源性生长因子β链(platelet-derived growth factor beta polypeptide,PDGF-β)启动子片段连接到空载体pUC18上构建出重组载体pUC18/PDGF-β-promoter;然后将GAL(intronⅡ)定向克隆于pUC18/PDGF-β-promoter下游,构建转基因载体pUC18/PDGF-β-promoter/GAL(intronⅡ).结果 PCR和限制性内切酶分析鉴定,表明获得转基因载体pUC18/PDGF-β-promoter/GAL(intronⅡ).通过对重构基因GAL(intronⅡ)的GALcDNA和第二内含子序列测序证实其与GenBank中的标准序列一致,GAL(intronⅡ)中第二内含子插入的位置准确,且无移码.结论 使用重叠延伸PCR扩增重构基因GAL(intronⅡ)并成功构建转基因载体pUC18/PDGF-β-promoter/GAL(intronⅡ),为转基因小鼠制备奠定一定的实验基础.
目的 剋隆甘丙肽重構基因GAL(intronⅡ),構建小鼠神經繫統特異性錶達甘丙肽(galanin,GAL)的轉基因載體pUC18/PDGF-β-promoter/GAL(intronⅡ),為製備GAL轉基因小鼠做準備.方法 通過常規PCR、RT-PCR及重疊延伸PCR(overlap extension PCR,OE-PCR)擴增齣插入GAL第二內含子的GAL全長cDNA的重構基因GAL(intronⅡ),將GAL(intronⅡ)剋隆入T載體進行酶切、測序鑒定;同時從psisCAT6α中切下血小闆源性生長因子β鏈(platelet-derived growth factor beta polypeptide,PDGF-β)啟動子片段連接到空載體pUC18上構建齣重組載體pUC18/PDGF-β-promoter;然後將GAL(intronⅡ)定嚮剋隆于pUC18/PDGF-β-promoter下遊,構建轉基因載體pUC18/PDGF-β-promoter/GAL(intronⅡ).結果 PCR和限製性內切酶分析鑒定,錶明穫得轉基因載體pUC18/PDGF-β-promoter/GAL(intronⅡ).通過對重構基因GAL(intronⅡ)的GALcDNA和第二內含子序列測序證實其與GenBank中的標準序列一緻,GAL(intronⅡ)中第二內含子插入的位置準確,且無移碼.結論 使用重疊延伸PCR擴增重構基因GAL(intronⅡ)併成功構建轉基因載體pUC18/PDGF-β-promoter/GAL(intronⅡ),為轉基因小鼠製備奠定一定的實驗基礎.
목적 극륭감병태중구기인GAL(intronⅡ),구건소서신경계통특이성표체감병태(galanin,GAL)적전기인재체pUC18/PDGF-β-promoter/GAL(intronⅡ),위제비GAL전기인소서주준비.방법 통과상규PCR、RT-PCR급중첩연신PCR(overlap extension PCR,OE-PCR)확증출삽입GAL제이내함자적GAL전장cDNA적중구기인GAL(intronⅡ),장GAL(intronⅡ)극륭입T재체진행매절、측서감정;동시종psisCAT6α중절하혈소판원성생장인자β련(platelet-derived growth factor beta polypeptide,PDGF-β)계동자편단련접도공재체pUC18상구건출중조재체pUC18/PDGF-β-promoter;연후장GAL(intronⅡ)정향극륭우pUC18/PDGF-β-promoter하유,구건전기인재체pUC18/PDGF-β-promoter/GAL(intronⅡ).결과 PCR화한제성내절매분석감정,표명획득전기인재체pUC18/PDGF-β-promoter/GAL(intronⅡ).통과대중구기인GAL(intronⅡ)적GALcDNA화제이내함자서렬측서증실기여GenBank중적표준서렬일치,GAL(intronⅡ)중제이내함자삽입적위치준학,차무이마.결론 사용중첩연신PCR확증중구기인GAL(intronⅡ)병성공구건전기인재체pUC18/PDGF-β-promoter/GAL(intronⅡ),위전기인소서제비전정일정적실험기출.
