快速构建哺乳动物细胞表面展示的全长人抗体基因库
쾌속구건포유동물세포표면전시적전장인항체기인고
Rapid construction of a mammalian cell surface display library of full-length human antibodies
  • 万方数据
    南方医科大学学报 남방의과대학학보
    JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
    2011年 2期 308-312 ,共5页

    贺微%李长征%陈振瑞%周烨%谭万龙%姜世勃%周志刚%刘叔文%周辰

    하미%리장정%진진서%주엽%담만룡%강세발%주지강%류숙문%주신

    快速构建%哺乳动物细胞展示%全长人源抗体库 快速構建%哺乳動物細胞展示%全長人源抗體庫
    쾌속구건%포유동물세포전시%전장인원항체고
    目的 快速构建哺乳动物细胞表面展示的全长人抗体基因库.方法 分离外周血淋巴细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,采用RT-PCR的方法扩增抗体重链可变区(VH)和全长Kappa型轻链(LCκ)基因库,分别插入载体pDGB-HC-TM,化学转化感受态大肠杆菌DH5α,构建抗体的轻、重链基因库,然后将其联合转染CHO细胞,流式细胞仪分析全长人源抗体在CHO细胞表面的表达.结果 构建的非特异性IgG1-Kappa抗体基因库,重链库容量达2.6×105,轻链库容量达2.0×105,理论库容量高达5.2×1010.随机从重链库和轻链库各挑选10个克隆送测序,重链10个克隆的DNA序列分析显示8个含有正确的阅读框架,轻链10个克降的DNA序列分析显示全部含有正确的阅读框架.流式细胞仪分析显示来自轻链库的10个克隆、重链库的8个克隆均可检测到抗体在CHO细胞表面的表达.用所构建的轻重链抗体库共转染CHO细胞,流式细胞仪分析可检测到抗体在细胞表面的表达,阳性细胞比例达到31.5%,说明所构建的抗体库能够在CHO细胞表面成功展示全长抗体.结论 采用本研究建立的哺乳动物细胞展示技术,可在2周内成功构建库容量大且多样性好的全人源抗体基因库,用于高亲和力特异性抗体的筛选.
    목적 쾌속구건포유동물세포표면전시적전장인항체기인고.방법 분리외주혈림파세포(PBMC),제취PBMC적총RNA,채용RT-PCR적방법확증항체중련가변구(VH)화전장Kappa형경련(LCκ)기인고,분별삽입재체pDGB-HC-TM,화학전화감수태대장간균DH5α,구건항체적경、중련기인고,연후장기연합전염CHO세포,류식세포의분석전장인원항체재CHO세포표면적표체.결과 구건적비특이성IgG1-Kappa항체기인고,중련고용량체2.6×105,경련고용량체2.0×105,이론고용량고체5.2×1010.수궤종중련고화경련고각도선10개극륭송측서,중련10개극륭적DNA서렬분석현시8개함유정학적열독광가,경련10개극강적DNA서렬분석현시전부함유정학적열독광가.류식세포의분석현시래자경련고적10개극륭、중련고적8개극륭균가검측도항체재CHO세포표면적표체.용소구건적경중련항체고공전염CHO세포,류식세포의분석가검측도항체재세포표면적표체,양성세포비례체도31.5%,설명소구건적항체고능구재CHO세포표면성공전시전장항체.결론 채용본연구건립적포유동물세포전시기술,가재2주내성공구건고용량대차다양성호적전인원항체기인고,용우고친화력특이성항체적사선.
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