中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2010年
7期
74-79
,共6页
施开创%莫胜兰%许瑞胜%李向涛%陈宏备%郑敏%刘棋
施開創%莫勝蘭%許瑞勝%李嚮濤%陳宏備%鄭敏%劉棋
시개창%막성란%허서성%리향도%진굉비%정민%류기
猪%Th1型细胞因子%荧光定量PCR%SYBR Green I
豬%Th1型細胞因子%熒光定量PCR%SYBR Green I
저%Th1형세포인자%형광정량PCR%SYBR Green I
针对猪Thl型细胞因子IL-2、IL-12p40、IFN-γ以及管家基因β-actin的基因序列分别设计-对特异性引物,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测IL-2、IL-12p40、IFN-γ及β-actin的SYBR Green I real-time PCR方法.该方法线性关系好,标准曲线的相关系数均达到0.997以上;敏感性高,初始模板的检出下限均达到100拷贝/μL;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;重复性好,组内与组间的变异系数均小于3.5%.应用所建立的方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒感染仔猪外周血单个核细胞中IL-2、IL-12p40和IFN-γ mRNA的表达水平进行了检测.结果表明,所建立的real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好.
針對豬Thl型細胞因子IL-2、IL-12p40、IFN-γ以及管傢基因β-actin的基因序列分彆設計-對特異性引物,構建含有各自引物擴增序列的重組質粒作為暘性標準品,建立瞭檢測IL-2、IL-12p40、IFN-γ及β-actin的SYBR Green I real-time PCR方法.該方法線性關繫好,標準麯線的相關繫數均達到0.997以上;敏感性高,初始模闆的檢齣下限均達到100拷貝/μL;特異性彊,擴增產物形成單一的特異性鎔解峰;重複性好,組內與組間的變異繫數均小于3.5%.應用所建立的方法對豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒感染仔豬外週血單箇覈細胞中IL-2、IL-12p40和IFN-γ mRNA的錶達水平進行瞭檢測.結果錶明,所建立的real-time PCR檢測方法靈敏度高、特異性彊、重複性好.
침대저Thl형세포인자IL-2、IL-12p40、IFN-γ이급관가기인β-actin적기인서렬분별설계-대특이성인물,구건함유각자인물확증서렬적중조질립작위양성표준품,건립료검측IL-2、IL-12p40、IFN-γ급β-actin적SYBR Green I real-time PCR방법.해방법선성관계호,표준곡선적상관계수균체도0.997이상;민감성고,초시모판적검출하한균체도100고패/μL;특이성강,확증산물형성단일적특이성용해봉;중복성호,조내여조간적변이계수균소우3.5%.응용소건립적방법대저번식여호흡종합정병독감염자저외주혈단개핵세포중IL-2、IL-12p40화IFN-γ mRNA적표체수평진행료검측.결과표명,소건립적real-time PCR검측방법령민도고、특이성강、중복성호.
