中国分子心脏病学杂志
中國分子心髒病學雜誌
중국분자심장병학잡지
MOLECULAR CARDIOLOGY OF CHINA
2010年
3期
147-151
,共5页
林吉进%刘树楷%武君%李妍妍
林吉進%劉樹楷%武君%李妍妍
림길진%류수해%무군%리연연
HERG钾通道%蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型12%蛋白质-蛋白质相互作用%酵母双杂交
HERG鉀通道%蛋白酪氨痠燐痠酶非受體型12%蛋白質-蛋白質相互作用%酵母雙雜交
HERG갑통도%단백락안산린산매비수체형12%단백질-단백질상호작용%효모쌍잡교
目的 鉴定HERG钾通道的相互作用蛋白,并进一步研究该相互作用蛋白对HERG钾通道的功能调控.方法 (1)应用酵母双杂交技术,构建含有HERG氨基末端的诱饵载体,将转染有诱饵载体的酵母菌AH109与预转染有人类cDNA文库的Y187酵母菌进行双杂交,初步筛选出HERG的相互作用蛋白;(2)应用免疫共沉淀技术进一步验证酵母双杂交所筛选蛋白与HERG之间的相互作用;(3)GST pull-down分析:应用GST-HERGT-NT融合蛋白和谷光苷肽-琼脂糖4B小球从大鼠心肌裂解物中沉淀蛋白质,应用抗PTPN12抗体对沉淀物进行Western Blot分析;(4)免疫荧光组织化学分析:应用抗PTPN12和抗HERG的抗体和荧光标记二抗显示PTPN12及HERG的亚细胞定位,应用激光共聚焦显微镜观察.结果 (1)酵母双杂交筛选发现蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型12(Protein tyrosine phosphatase nonreceptor type 12,PTPN12)与HERG氨基末端存在相互作用;(2)免疫共沉淀分析发现抗HERG的抗体能够沉淀HERG和PTPN12复合物;(3)GST pull-down分析发现GST-HERG-NT能够将PTPN12沉淀,而GST蛋白则不能沉淀PTPN12;(4)免疫荧光组织化学分析发现PTPN12和HERG两个蛋白共定位的地方主要出现在细胞膜.结论 PTPN12与HERG氨基末端相互作用,这一发现将有助于更加透彻地理解HERG通道特性多样性的分子基础和LQTS的发病机理.
目的 鑒定HERG鉀通道的相互作用蛋白,併進一步研究該相互作用蛋白對HERG鉀通道的功能調控.方法 (1)應用酵母雙雜交技術,構建含有HERG氨基末耑的誘餌載體,將轉染有誘餌載體的酵母菌AH109與預轉染有人類cDNA文庫的Y187酵母菌進行雙雜交,初步篩選齣HERG的相互作用蛋白;(2)應用免疫共沉澱技術進一步驗證酵母雙雜交所篩選蛋白與HERG之間的相互作用;(3)GST pull-down分析:應用GST-HERGT-NT融閤蛋白和穀光苷肽-瓊脂糖4B小毬從大鼠心肌裂解物中沉澱蛋白質,應用抗PTPN12抗體對沉澱物進行Western Blot分析;(4)免疫熒光組織化學分析:應用抗PTPN12和抗HERG的抗體和熒光標記二抗顯示PTPN12及HERG的亞細胞定位,應用激光共聚焦顯微鏡觀察.結果 (1)酵母雙雜交篩選髮現蛋白酪氨痠燐痠酶非受體型12(Protein tyrosine phosphatase nonreceptor type 12,PTPN12)與HERG氨基末耑存在相互作用;(2)免疫共沉澱分析髮現抗HERG的抗體能夠沉澱HERG和PTPN12複閤物;(3)GST pull-down分析髮現GST-HERG-NT能夠將PTPN12沉澱,而GST蛋白則不能沉澱PTPN12;(4)免疫熒光組織化學分析髮現PTPN12和HERG兩箇蛋白共定位的地方主要齣現在細胞膜.結論 PTPN12與HERG氨基末耑相互作用,這一髮現將有助于更加透徹地理解HERG通道特性多樣性的分子基礎和LQTS的髮病機理.
목적 감정HERG갑통도적상호작용단백,병진일보연구해상호작용단백대HERG갑통도적공능조공.방법 (1)응용효모쌍잡교기술,구건함유HERG안기말단적유이재체,장전염유유이재체적효모균AH109여예전염유인류cDNA문고적Y187효모균진행쌍잡교,초보사선출HERG적상호작용단백;(2)응용면역공침정기술진일보험증효모쌍잡교소사선단백여HERG지간적상호작용;(3)GST pull-down분석:응용GST-HERGT-NT융합단백화곡광감태-경지당4B소구종대서심기렬해물중침정단백질,응용항PTPN12항체대침정물진행Western Blot분석;(4)면역형광조직화학분석:응용항PTPN12화항HERG적항체화형광표기이항현시PTPN12급HERG적아세포정위,응용격광공취초현미경관찰.결과 (1)효모쌍잡교사선발현단백락안산린산매비수체형12(Protein tyrosine phosphatase nonreceptor type 12,PTPN12)여HERG안기말단존재상호작용;(2)면역공침정분석발현항HERG적항체능구침정HERG화PTPN12복합물;(3)GST pull-down분석발현GST-HERG-NT능구장PTPN12침정,이GST단백칙불능침정PTPN12;(4)면역형광조직화학분석발현PTPN12화HERG량개단백공정위적지방주요출현재세포막.결론 PTPN12여HERG안기말단상호작용,저일발현장유조우경가투철지리해HERG통도특성다양성적분자기출화LQTS적발병궤리.
