四川农业大学学报
四川農業大學學報
사천농업대학학보
JOURNAL OF SICHUAN AGRICULTURAL UNIVERSITY
2009年
2期
218-222
,共5页
陈红英%崔沛%崔保安%胡功政%朱前磊%王子馨
陳紅英%崔沛%崔保安%鬍功政%硃前磊%王子馨
진홍영%최패%최보안%호공정%주전뢰%왕자형
鸡IL-18%克隆%原核表达%活性检测
鷄IL-18%剋隆%原覈錶達%活性檢測
계IL-18%극륭%원핵표체%활성검측
应用RT-PCR技术从罗曼鸡脾淋巴细胞RNA中扩增鸡白细胞介素18(ChIL-18)全基因,并克隆和测序.结果表明,获得了ChIL-18全序列,其大小为597 bp.将其成熟蛋白基因(510 bp)亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG的诱导下表达融合蛋白(GST-ChIL-18).SDS-PAGE可检测到分子质量为约46 kDa的融合蛋白,Western blot证实该融合蛋白可与鼠抗鸡IL-18单克隆抗体发生特异性反应.用MTT法测定表明,重组蛋白能明显促进鸡T细胞转化的活性.
應用RT-PCR技術從囉曼鷄脾淋巴細胞RNA中擴增鷄白細胞介素18(ChIL-18)全基因,併剋隆和測序.結果錶明,穫得瞭ChIL-18全序列,其大小為597 bp.將其成熟蛋白基因(510 bp)亞剋隆到原覈錶達載體pGEX-6P-1中,轉化大腸桿菌BL21(DE3),在IPTG的誘導下錶達融閤蛋白(GST-ChIL-18).SDS-PAGE可檢測到分子質量為約46 kDa的融閤蛋白,Western blot證實該融閤蛋白可與鼠抗鷄IL-18單剋隆抗體髮生特異性反應.用MTT法測定錶明,重組蛋白能明顯促進鷄T細胞轉化的活性.
응용RT-PCR기술종라만계비림파세포RNA중확증계백세포개소18(ChIL-18)전기인,병극륭화측서.결과표명,획득료ChIL-18전서렬,기대소위597 bp.장기성숙단백기인(510 bp)아극륭도원핵표체재체pGEX-6P-1중,전화대장간균BL21(DE3),재IPTG적유도하표체융합단백(GST-ChIL-18).SDS-PAGE가검측도분자질량위약46 kDa적융합단백,Western blot증실해융합단백가여서항계IL-18단극륭항체발생특이성반응.용MTT법측정표명,중조단백능명현촉진계T세포전화적활성.
