中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2008年
12期
30-35
,共6页
徐美娟%杨套伟%饶志明%沈微%张传志%诸葛斌%方慧英%诸葛健
徐美娟%楊套偉%饒誌明%瀋微%張傳誌%諸葛斌%方慧英%諸葛健
서미연%양투위%요지명%침미%장전지%제갈빈%방혜영%제갈건
克雷伯氏菌%甘油脱氢酶%纯化%酶学性质
剋雷伯氏菌%甘油脫氫酶%純化%酶學性質
극뢰백씨균%감유탈경매%순화%매학성질
以克雷伯氏菌基因组DNA为模板,扩增得到编码甘油脱氢酶(GDH)的基因dhaD,将其克隆到大肠杆菌表达载体pET-28a(+)上,在E.coliBL21(DE3)中诱导表达,利用表达载体pET-28a(+)上的6·His-Tag标记选用Ni柱亲和层析法纯化表达具有活性的甘油脱氢酶(GDH),纯化后比酶活达到156U/mg,纯化倍数达4.6倍,回收率为67.4%.并初步研究了该酶的酶学性质,酶反应的最适pH为11.0,在pH7.0～12.0范围内稳定;酶反应的最适温度为30℃,稳定范围为25～45℃;酶动力学参数以甘油为底物的Km为0.54 mmol/L,Vmax为0.49 μmol/ml·min.
以剋雷伯氏菌基因組DNA為模闆,擴增得到編碼甘油脫氫酶(GDH)的基因dhaD,將其剋隆到大腸桿菌錶達載體pET-28a(+)上,在E.coliBL21(DE3)中誘導錶達,利用錶達載體pET-28a(+)上的6·His-Tag標記選用Ni柱親和層析法純化錶達具有活性的甘油脫氫酶(GDH),純化後比酶活達到156U/mg,純化倍數達4.6倍,迴收率為67.4%.併初步研究瞭該酶的酶學性質,酶反應的最適pH為11.0,在pH7.0～12.0範圍內穩定;酶反應的最適溫度為30℃,穩定範圍為25～45℃;酶動力學參數以甘油為底物的Km為0.54 mmol/L,Vmax為0.49 μmol/ml·min.
이극뢰백씨균기인조DNA위모판,확증득도편마감유탈경매(GDH)적기인dhaD,장기극륭도대장간균표체재체pET-28a(+)상,재E.coliBL21(DE3)중유도표체,이용표체재체pET-28a(+)상적6·His-Tag표기선용Ni주친화층석법순화표체구유활성적감유탈경매(GDH),순화후비매활체도156U/mg,순화배수체4.6배,회수솔위67.4%.병초보연구료해매적매학성질,매반응적최괄pH위11.0,재pH7.0～12.0범위내은정;매반응적최괄온도위30℃,은정범위위25～45℃;매동역학삼수이감유위저물적Km위0.54 mmol/L,Vmax위0.49 μmol/ml·min.
