中国寄生虫学与寄生虫病杂志
中國寄生蟲學與寄生蟲病雜誌
중국기생충학여기생충병잡지
CHINESE JOURNAL OF PARASITOLOGY AND PARASITIC DISEASES
2008年
5期
389-391
,共3页
田占成%刘光远%谢俊仁%龚真莉
田佔成%劉光遠%謝俊仁%龔真莉
전점성%류광원%사준인%공진리
微小牛蜱%唾液腺%cDNA文库构建
微小牛蜱%唾液腺%cDNA文庫構建
미소우비%타액선%cDNA문고구건
从微小牛蜱唾液腺中提取RNA,纯化mRNA,合成双链cDNA,定向克隆到kSCREEN载体的两臂之间.用噬菌体蛋白包装产物对以上连接产物进行体外包装以形成完整的噬菌体,转染大肠埃希菌ER1647,构建成微小牛蜱唾液腺的cDNA表达文库.经测定,文库的库容量约为1.38×106 PFU,重组率为100%,扩增后文库的滴度为2×109PFU/ml.用兔抗微小牛蜱唾液腺蛋白阳性血清,对文库进行初步免疫学筛选,获得一个细胞色素氧化酶第2哑基cDNA序列.将该基因序列与GenBank中的序列进行同源性比对,发现与已知的其他物种细胞色素氧化酶第2亚基的氨基酸序列同源性为60%～77%.微小牛蜱唾液腺cDNA表达文库构建成功.
從微小牛蜱唾液腺中提取RNA,純化mRNA,閤成雙鏈cDNA,定嚮剋隆到kSCREEN載體的兩臂之間.用噬菌體蛋白包裝產物對以上連接產物進行體外包裝以形成完整的噬菌體,轉染大腸埃希菌ER1647,構建成微小牛蜱唾液腺的cDNA錶達文庫.經測定,文庫的庫容量約為1.38×106 PFU,重組率為100%,擴增後文庫的滴度為2×109PFU/ml.用兔抗微小牛蜱唾液腺蛋白暘性血清,對文庫進行初步免疫學篩選,穫得一箇細胞色素氧化酶第2啞基cDNA序列.將該基因序列與GenBank中的序列進行同源性比對,髮現與已知的其他物種細胞色素氧化酶第2亞基的氨基痠序列同源性為60%～77%.微小牛蜱唾液腺cDNA錶達文庫構建成功.
종미소우비타액선중제취RNA,순화mRNA,합성쌍련cDNA,정향극륭도kSCREEN재체적량비지간.용서균체단백포장산물대이상련접산물진행체외포장이형성완정적서균체,전염대장애희균ER1647,구건성미소우비타액선적cDNA표체문고.경측정,문고적고용량약위1.38×106 PFU,중조솔위100%,확증후문고적적도위2×109PFU/ml.용토항미소우비타액선단백양성혈청,대문고진행초보면역학사선,획득일개세포색소양화매제2아기cDNA서렬.장해기인서렬여GenBank중적서렬진행동원성비대,발현여이지적기타물충세포색소양화매제2아기적안기산서렬동원성위60%～77%.미소우비타액선cDNA표체문고구건성공.
