生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2008年
6期
152-157
,共6页
张文婷%张莲芬%周利苹%金坚
張文婷%張蓮芬%週利蘋%金堅
장문정%장련분%주리평%금견
荧光定量PCR%纤溶酶原激活剂抑制物-1%人微血管内皮细胞%全反式维甲酸
熒光定量PCR%纖溶酶原激活劑抑製物-1%人微血管內皮細胞%全反式維甲痠
형광정량PCR%섬용매원격활제억제물-1%인미혈관내피세포%전반식유갑산
为了建立用荧光定量PCR检测人微血管内皮细胞纤溶酶原激活剂抑制物-1(PAI-1)mRNA表达的方法.提取人微血管内皮细总RNA,经RT-PCR获得靶基因(PAI-1)及管家基因(β-actin)的PCR产物.纯化后,作为标准品梯度稀释,采用SYBR Green I定量PCR检测,建立标准曲线.方法学考核参数为特异性、线性范围、灵敏性和重复性.分析全反式维甲酸对内皮细胞表达PAI-1 mRNA的干预效果.这种定量方法特异性好,检测的灵敏度达103拷贝,线性范围为104～1010拷贝,循环阚值与PCR体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系(r2>0.990),批内变异≤4.93%,批间变异≤9.12%.全反式维甲酸能上调内皮细胞PAI-1 mRNA的表达,且呈剂量依赖性.因此,荧光定量RT-PCR检测血管内皮细胞PAI-1基因表达的方法有助于溶栓药物药理学的研究和新药筛选.
為瞭建立用熒光定量PCR檢測人微血管內皮細胞纖溶酶原激活劑抑製物-1(PAI-1)mRNA錶達的方法.提取人微血管內皮細總RNA,經RT-PCR穫得靶基因(PAI-1)及管傢基因(β-actin)的PCR產物.純化後,作為標準品梯度稀釋,採用SYBR Green I定量PCR檢測,建立標準麯線.方法學攷覈參數為特異性、線性範圍、靈敏性和重複性.分析全反式維甲痠對內皮細胞錶達PAI-1 mRNA的榦預效果.這種定量方法特異性好,檢測的靈敏度達103拷貝,線性範圍為104～1010拷貝,循環闞值與PCR體繫中起始模闆量的對數值之間有著良好的線性關繫(r2>0.990),批內變異≤4.93%,批間變異≤9.12%.全反式維甲痠能上調內皮細胞PAI-1 mRNA的錶達,且呈劑量依賴性.因此,熒光定量RT-PCR檢測血管內皮細胞PAI-1基因錶達的方法有助于溶栓藥物藥理學的研究和新藥篩選.
위료건립용형광정량PCR검측인미혈관내피세포섬용매원격활제억제물-1(PAI-1)mRNA표체적방법.제취인미혈관내피세총RNA,경RT-PCR획득파기인(PAI-1)급관가기인(β-actin)적PCR산물.순화후,작위표준품제도희석,채용SYBR Green I정량PCR검측,건립표준곡선.방법학고핵삼수위특이성、선성범위、령민성화중복성.분석전반식유갑산대내피세포표체PAI-1 mRNA적간예효과.저충정량방법특이성호,검측적령민도체103고패,선성범위위104～1010고패,순배감치여PCR체계중기시모판량적대수치지간유착량호적선성관계(r2>0.990),비내변이≤4.93%,비간변이≤9.12%.전반식유갑산능상조내피세포PAI-1 mRNA적표체,차정제량의뢰성.인차,형광정량RT-PCR검측혈관내피세포PAI-1기인표체적방법유조우용전약물약이학적연구화신약사선.
