科学技术与工程
科學技術與工程
과학기술여공정
SCIENCE TECHNOLOGY AND ENGINEERING
2008年
5期
1151-1155
,共5页
雷迎峰%尹文%杨敬%吕欣%韦三华%安群星%徐志凯
雷迎峰%尹文%楊敬%呂訢%韋三華%安群星%徐誌凱
뢰영봉%윤문%양경%려흔%위삼화%안군성%서지개
丙型肝炎病毒%NS3/4A丝氨酸蛋白酶%大肠杆菌%蛋白表达
丙型肝炎病毒%NS3/4A絲氨痠蛋白酶%大腸桿菌%蛋白錶達
병형간염병독%NS3/4A사안산단백매%대장간균%단백표체
在大肠杆菌中HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶获得表达并进行纯化.根据NS3与NS4A两者形成异源二聚体的结构要求,并参照文献,通过基因拼接的方法设计了单链NS3/4A丝氨酸蛋白酶的基因.合成相应引物,利用反转录PCR从HCV患者血液中扩增出该蛋白酶的编码基因,克隆入原核表达载体pRSET-A,将重组表达质粒pRSET-A-ns3/4a转化BL211(DE3)大肠杆菌,并诱导表达与纯化.成功地构建了重组表达质粒pRSET-A-ns3/4a;重组质粒转化的BL21工程菌经IPTG诱导表达后,表达产物经SDS-PAGE和western-h1ot证实为NS3/4A丝氨酸蛋白酶,并用镍离子亲和层析方法获得纯化蛋白酶.获得的纯化NS3/4A丝氨酸蛋白酶为建立其酶活性测定系统奠定了基础.
在大腸桿菌中HCV NS3/4A絲氨痠蛋白酶穫得錶達併進行純化.根據NS3與NS4A兩者形成異源二聚體的結構要求,併參照文獻,通過基因拼接的方法設計瞭單鏈NS3/4A絲氨痠蛋白酶的基因.閤成相應引物,利用反轉錄PCR從HCV患者血液中擴增齣該蛋白酶的編碼基因,剋隆入原覈錶達載體pRSET-A,將重組錶達質粒pRSET-A-ns3/4a轉化BL211(DE3)大腸桿菌,併誘導錶達與純化.成功地構建瞭重組錶達質粒pRSET-A-ns3/4a;重組質粒轉化的BL21工程菌經IPTG誘導錶達後,錶達產物經SDS-PAGE和western-h1ot證實為NS3/4A絲氨痠蛋白酶,併用鎳離子親和層析方法穫得純化蛋白酶.穫得的純化NS3/4A絲氨痠蛋白酶為建立其酶活性測定繫統奠定瞭基礎.
재대장간균중HCV NS3/4A사안산단백매획득표체병진행순화.근거NS3여NS4A량자형성이원이취체적결구요구,병삼조문헌,통과기인병접적방법설계료단련NS3/4A사안산단백매적기인.합성상응인물,이용반전록PCR종HCV환자혈액중확증출해단백매적편마기인,극륭입원핵표체재체pRSET-A,장중조표체질립pRSET-A-ns3/4a전화BL211(DE3)대장간균,병유도표체여순화.성공지구건료중조표체질립pRSET-A-ns3/4a;중조질립전화적BL21공정균경IPTG유도표체후,표체산물경SDS-PAGE화western-h1ot증실위NS3/4A사안산단백매,병용얼리자친화층석방법획득순화단백매.획득적순화NS3/4A사안산단백매위건립기매활성측정계통전정료기출.
