CAJ | 학술논문

目的:大量的实验证实,嗅鞘细胞是能促进已损伤的中枢神经重新恢复功能最有效的种子细胞之一.实验拟建立一种简便易行、省时、经济,临床应用更安全,临床效果更好的培养和纯化嗅鞘细胞的方法.方法:实验于2004-12/2006-12在山东省泰安荣军医院细胞实验室完成.流产胚胎(4～6个月,由家属自愿捐献).实验方法:在无菌条件下,用显微外科器械将胚胎的嗅球取出,在解剖显微镜下仔细剥离嗅球表面的软膜和血管,尽量保持嗅球完整性,然后用眼科剪反复剪碎,剪成0.5～1.0 mm3大小的组织块,将组织块移入离心管内,加入含有13%胎牛血清的D/F12培养液,用弯头吸管来回轻轻吹打组织块制成细胞悬液,用含有阿糖胞苷的无血清纯化液纯化嗅鞘细胞,胰蛋白酶消化收集细胞,制成单细胞悬液并进行计数.结果:胚胎嗅鞘细胞在24 h后开始部分贴壁,胞体呈球形、星形,有一个甚至多个突起,但突起短小.贴壁3 d后,大部分细胞迅速生长,突起延伸变长.贴壁5～7 d后,随着培养时间的延长,嗅鞘细胞成簇密集排列生长,细胞突起相互交织越来越多,形成网状.可见3种比较典型的嗅鞘细胞:双极或梭形、多突起形和扁圆或油煎蛋形.主要以梭形和多突起形细胞为主.细胞培养至7～14 d时细胞数量不再有明显增加,但是细胞仍生长旺盛,活性好,细胞纯度高达95%～98%.结论:实验建立的人胚胎嗅鞘细胞培养的方法简便易行,经济,细胞纯度较高.
목적:대량적실험증실,후초세포시능촉진이손상적중추신경중신회복공능최유효적충자세포지일.실험의건립일충간편역행、성시、경제,림상응용경안전,림상효과경호적배양화순화후초세포적방법.방법:실험우2004-12/2006-12재산동성태안영군의원세포실험실완성.유산배태(4～6개월,유가속자원연헌).실험방법:재무균조건하,용현미외과기계장배태적후구취출,재해부현미경하자세박리후구표면적연막화혈관,진량보지후구완정성,연후용안과전반복전쇄,전성0.5～1.0 mm3대소적조직괴,장조직괴이입리심관내,가입함유13%태우혈청적D/F12배양액,용만두흡관래회경경취타조직괴제성세포현액,용함유아당포감적무혈청순화액순화후초세포,이단백매소화수집세포,제성단세포현액병진행계수.결과:배태후초세포재24 h후개시부분첩벽,포체정구형、성형,유일개심지다개돌기,단돌기단소.첩벽3 d후,대부분세포신속생장,돌기연신변장.첩벽5～7 d후,수착배양시간적연장,후초세포성족밀집배렬생장,세포돌기상호교직월래월다,형성망상.가견3충비교전형적후초세포:쌍겁혹사형、다돌기형화편원혹유전단형.주요이사형화다돌기형세포위주.세포배양지7～14 d시세포수량불재유명현증가,단시세포잉생장왕성,활성호,세포순도고체95%～98%.결론:실험건립적인배태후초세포배양적방법간편역행,경제,세포순도교고.