解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2007年
6期
692-696
,共5页
戴汉川%龙良启%曾翠平%伍晓雄
戴漢川%龍良啟%曾翠平%伍曉雄
대한천%룡량계%증취평%오효웅
瘦素%胎盘%克隆%基因表达%反转录聚合链式反应%人
瘦素%胎盤%剋隆%基因錶達%反轉錄聚閤鏈式反應%人
수소%태반%극륭%기인표체%반전록취합련식반응%인
目的 克隆人瘦素(leptin)基因,构建融合表达载体,实现在大肠杆菌中的高效表达.方法 从人胎盘中提取RNA,利用反转录聚合链式反应(RT-PCR),克隆到人的leptin基因编码序列,对该基因片段进行T载体克隆、酶切和PCR鉴定,并且对其进行序列分析.将leptin基因插入到原核表达载体PET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG进行诱导,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析,并利用脱氧胆酸钠对表达蛋白进行纯化.结果 DNA序列分析表明,从胎盘中克隆的人leptin序列与文献报道的一致,酶切鉴定证实leptin基因正确地插入到了表达载体中,经IPTG诱导和SDS-PAGE电泳分析,人leptin基因在大肠杆菌中实现了高效融合表达,表达产物的分子量为20kD,经过纯化,得到了较纯的融合表达蛋白.结论 从人胎盘中成功克隆了leptin基因,构建了原核表达载体,实现了在大肠杆菌中的高效表达,为进一步研究leptin的生物学功能奠定基础.
目的 剋隆人瘦素(leptin)基因,構建融閤錶達載體,實現在大腸桿菌中的高效錶達.方法 從人胎盤中提取RNA,利用反轉錄聚閤鏈式反應(RT-PCR),剋隆到人的leptin基因編碼序列,對該基因片段進行T載體剋隆、酶切和PCR鑒定,併且對其進行序列分析.將leptin基因插入到原覈錶達載體PET-28a中,轉化大腸桿菌BL21(DE3)感受態細胞,利用IPTG進行誘導,對錶達產物進行SDS-PAGE電泳分析,併利用脫氧膽痠鈉對錶達蛋白進行純化.結果 DNA序列分析錶明,從胎盤中剋隆的人leptin序列與文獻報道的一緻,酶切鑒定證實leptin基因正確地插入到瞭錶達載體中,經IPTG誘導和SDS-PAGE電泳分析,人leptin基因在大腸桿菌中實現瞭高效融閤錶達,錶達產物的分子量為20kD,經過純化,得到瞭較純的融閤錶達蛋白.結論 從人胎盤中成功剋隆瞭leptin基因,構建瞭原覈錶達載體,實現瞭在大腸桿菌中的高效錶達,為進一步研究leptin的生物學功能奠定基礎.
목적 극륭인수소(leptin)기인,구건융합표체재체,실현재대장간균중적고효표체.방법 종인태반중제취RNA,이용반전록취합련식반응(RT-PCR),극륭도인적leptin기인편마서렬,대해기인편단진행T재체극륭、매절화PCR감정,병차대기진행서렬분석.장leptin기인삽입도원핵표체재체PET-28a중,전화대장간균BL21(DE3)감수태세포,이용IPTG진행유도,대표체산물진행SDS-PAGE전영분석,병이용탈양담산납대표체단백진행순화.결과 DNA서렬분석표명,종태반중극륭적인leptin서렬여문헌보도적일치,매절감정증실leptin기인정학지삽입도료표체재체중,경IPTG유도화SDS-PAGE전영분석,인leptin기인재대장간균중실현료고효융합표체,표체산물적분자량위20kD,경과순화,득도료교순적융합표체단백.결론 종인태반중성공극륭료leptin기인,구건료원핵표체재체,실현료재대장간균중적고효표체,위진일보연구leptin적생물학공능전정기출.
