细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2007年
12期
1144-1146
,共3页
李昌%金宁一%王宏伟%刘玉生%于芳%佟敬山%胡宁宁
李昌%金寧一%王宏偉%劉玉生%于芳%佟敬山%鬍寧寧
리창%금저일%왕굉위%류옥생%우방%동경산%호저저
HIV-1%外膜蛋白%单链抗体%酵母分泌表达
HIV-1%外膜蛋白%單鏈抗體%酵母分泌錶達
HIV-1%외막단백%단련항체%효모분비표체
目的:构建含抗HIV-1外膜蛋白gp120单链抗体(scFv)基因的酵母表达载体,实现目的蛋白的分泌性表达,并检测其生物活性.方法:采用基因工程和重组DNA技术,从质粒pET28-scFv中切下目的基因片段,定向克隆入毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9的相应位点,构建重组酵母表达质粒pPIC9-scFv.Bgl Ⅱ线性化后,电转化入受体酵母菌GS115中,筛选阳性重组子,进行甲醇诱导表达,并用RT-PCR、SDS-PAGE、双抗体夹心Dot-ELISA法分析目的蛋白表达情况.结果:通过表型筛选、PCR鉴定获得阳性重组酵母工程菌,RT-PCR、SDS-PAGE分析表明目的蛋白得到很好表达,表达量可占培养液上清总蛋白量的18%,双抗体夹心Dot-ELISA法检测,表达产物能够特异识别重组HIV-1 gp120抗原蛋白并与之发生特异性免疫反应,证明表达的重组scFv具有良好的抗体活性.结论:成功地实现了scFv基因的分泌性表达,为抗AIDS靶向治疗及进一步研究其抗HIV活性提供了依据.
目的:構建含抗HIV-1外膜蛋白gp120單鏈抗體(scFv)基因的酵母錶達載體,實現目的蛋白的分泌性錶達,併檢測其生物活性.方法:採用基因工程和重組DNA技術,從質粒pET28-scFv中切下目的基因片段,定嚮剋隆入畢赤酵母分泌型錶達載體pPIC9的相應位點,構建重組酵母錶達質粒pPIC9-scFv.Bgl Ⅱ線性化後,電轉化入受體酵母菌GS115中,篩選暘性重組子,進行甲醇誘導錶達,併用RT-PCR、SDS-PAGE、雙抗體夾心Dot-ELISA法分析目的蛋白錶達情況.結果:通過錶型篩選、PCR鑒定穫得暘性重組酵母工程菌,RT-PCR、SDS-PAGE分析錶明目的蛋白得到很好錶達,錶達量可佔培養液上清總蛋白量的18%,雙抗體夾心Dot-ELISA法檢測,錶達產物能夠特異識彆重組HIV-1 gp120抗原蛋白併與之髮生特異性免疫反應,證明錶達的重組scFv具有良好的抗體活性.結論:成功地實現瞭scFv基因的分泌性錶達,為抗AIDS靶嚮治療及進一步研究其抗HIV活性提供瞭依據.
목적:구건함항HIV-1외막단백gp120단련항체(scFv)기인적효모표체재체,실현목적단백적분비성표체,병검측기생물활성.방법:채용기인공정화중조DNA기술,종질립pET28-scFv중절하목적기인편단,정향극륭입필적효모분비형표체재체pPIC9적상응위점,구건중조효모표체질립pPIC9-scFv.Bgl Ⅱ선성화후,전전화입수체효모균GS115중,사선양성중조자,진행갑순유도표체,병용RT-PCR、SDS-PAGE、쌍항체협심Dot-ELISA법분석목적단백표체정황.결과:통과표형사선、PCR감정획득양성중조효모공정균,RT-PCR、SDS-PAGE분석표명목적단백득도흔호표체,표체량가점배양액상청총단백량적18%,쌍항체협심Dot-ELISA법검측,표체산물능구특이식별중조HIV-1 gp120항원단백병여지발생특이성면역반응,증명표체적중조scFv구유량호적항체활성.결론:성공지실현료scFv기인적분비성표체,위항AIDS파향치료급진일보연구기항HIV활성제공료의거.
