CAJ | 학술논문

目的构建人颗粒溶素(GNLY)质粒,进行原核表达,纯化得到相对分子质量9 000目的片段,免疫新西兰大白兔得到兔抗GNLY多克隆抗体.方法分离外周血单个核细胞,用卡介苗和白细胞介素-2(IL-2)刺激,培养12 d.抽提细胞RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得含有222 bp的GNLY cDNA,克隆到pMD18-T载体,测序正确后再亚克隆到质粒pET28a(+)中,得到重组质粒pET28a(+)-GNLY并将其转化大肠杆菌,诱导表达后用镍(Ni)亲和层析纯化,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹试验(Western blot)进行鉴定.用纯化的蛋白免疫新西兰大白兔,得到抗-GNLY特异性多抗.结果成功构建了pET28a(+)-GNLY表达质粒.用大肠杆菌表达带6个组氨酸的融合蛋白并进行纯化,最后免疫兔得到抗-GNLY特异性多抗,并经Western blot验证正确.结论获得了纯化的GNLY蛋白和抗-GNLY多抗血清,为今后对疾病中细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和自然杀伤(NK)细胞活性的研究打下了基础.
목적 구건인과립용소(GNLY)질립,진행원핵표체,순화득도상대분자질량9 000목적 편단,면역신서란대백토득도토항GNLY다극륭항체.방법분리외주혈단개핵세포,용잡개묘화백세포개소-2(IL-2)자격,배양12 d.추제세포RNA,통과역전록취합매련반응(RT-PCR)획득함유222 bp적GNLY cDNA,극륭도pMD18-T재체,측서정학후재아극륭도질립pET28a(+)중,득도중조질립pET28a(+)-GNLY병장기전화대장간균,유도표체후용얼(Ni)친화층석순화,십이완기류산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)화면역인적시험(Western blot)진행감정.용순화적단백면역신서란대백토,득도항-GNLY특이성다항.결과성공구건료pET28a(+)-GNLY표체질립.용대장간균표체대6개조안산적융합단백병진행순화,최후면역토득도항-GNLY특이성다항,병경Western blot험증정학.결론획득료순화적GNLY단백화항-GNLY다항혈청,위금후대질병중세포독성T림파세포(CTL)화자연살상(NK)세포활성적연구타하료기출.