CAJ | 학술논문

目的:观察脑源性神经营养因子促进神经干细胞在体内外条件下定向分化的作用,探索神经干细胞在体内外定向分化的规律.方法:实验于2006-09/2007-04在南京医科大学分子生物学实验室和动物实验中心完成.①体外研究:取孕14～16 d的胚胎大鼠脑组织,以无血清培养基培养获得神经干细胞,随即分成两组进行体外研究.实验组(n=10),加入5%胎牛血清和20 μg/L脑源性神经营养因子诱导其体外条件下定向分化,对照组(n=10),仅加入5%胎牛血清,用免疫荧光及流式细胞仪的方法来检测定向分化得到的神经元及其比例.②体内研究:参照Bavetta等的方法制作大鼠脊髓(T10)右半切4 mm长块状缺损模型.实验组(n=10):注射移植溴脱氧尿苷标记的细胞密度为1×109 L-1的神经干细胞悬液20μL.对照组(n=10):注射移植20 μL PBS于模型动物中.12周后,行辣根过氧化物酶神经逆行示踪评价脊髓感觉和传导功能的恢复程度,并取损伤处脊髓组织行免疫组织化学染色,观察缺损处打入的神经干细胞的存活,分化和迁移情况.结果:参加体内实验的20只大鼠均进入结果分析.①体外条件下,两组神经干细胞定向分化后均得到微管相关蛋白2阳性神经元,并且实验组微管相关蛋白2阳性神经元的比例在分化后第3天达最高峰,约为60%,而同期对照组仅约为30%,差异有统计学意义(P＜0.05).②体内条件下,移植12周后,免疫组织化学染色显示:体内实验组损伤脊髓处可见溴脱氧尿苷标记的阳性细胞,且缺损处可见大量神经微丝相关蛋白和神经生长相关蛋白染色阳性的神经元,体内对照组则未见以上两种蛋白染色阳性的神经元.辣根过氧化物酶神经逆行示踪显示:体内实验组脑组织可见到部分辣根过氧化物酶标记阳性神经元,而体内对照组未见辣根过氧化物酶阳性神经元.结论:脑源性神经营养因子促进神经干细胞体内外条件下定向分化为神经元,3 d达分化高峰.在体内条件下,外源的神经干细胞能存活、分化、迁移并替代修复脊髓神经传导束,有利于受损的脊髓功能恢复. 目的:觀察腦源性神經營養因子促進神經榦細胞在體內外條件下定嚮分化的作用,探索神經榦細胞在體內外定嚮分化的規律.方法:實驗于2006-09/2007-04在南京醫科大學分子生物學實驗室和動物實驗中心完成.①體外研究:取孕14～16 d的胚胎大鼠腦組織,以無血清培養基培養穫得神經榦細胞,隨即分成兩組進行體外研究.實驗組(n=10),加入5%胎牛血清和20 μg/L腦源性神經營養因子誘導其體外條件下定嚮分化,對照組(n=10),僅加入5%胎牛血清,用免疫熒光及流式細胞儀的方法來檢測定嚮分化得到的神經元及其比例.②體內研究:參照Bavetta等的方法製作大鼠脊髓(T10)右半切4 mm長塊狀缺損模型.實驗組(n=10):註射移植溴脫氧尿苷標記的細胞密度為1×109 L-1的神經榦細胞懸液20μL.對照組(n=10):註射移植20 μL PBS于模型動物中.12週後,行辣根過氧化物酶神經逆行示蹤評價脊髓感覺和傳導功能的恢複程度,併取損傷處脊髓組織行免疫組織化學染色,觀察缺損處打入的神經榦細胞的存活,分化和遷移情況.結果:參加體內實驗的20隻大鼠均進入結果分析.①體外條件下,兩組神經榦細胞定嚮分化後均得到微管相關蛋白2暘性神經元,併且實驗組微管相關蛋白2暘性神經元的比例在分化後第3天達最高峰,約為60%,而同期對照組僅約為30%,差異有統計學意義(P＜0.05).②體內條件下,移植12週後,免疫組織化學染色顯示:體內實驗組損傷脊髓處可見溴脫氧尿苷標記的暘性細胞,且缺損處可見大量神經微絲相關蛋白和神經生長相關蛋白染色暘性的神經元,體內對照組則未見以上兩種蛋白染色暘性的神經元.辣根過氧化物酶神經逆行示蹤顯示:體內實驗組腦組織可見到部分辣根過氧化物酶標記暘性神經元,而體內對照組未見辣根過氧化物酶暘性神經元.結論:腦源性神經營養因子促進神經榦細胞體內外條件下定嚮分化為神經元,3 d達分化高峰.在體內條件下,外源的神經榦細胞能存活、分化、遷移併替代脩複脊髓神經傳導束,有利于受損的脊髓功能恢複.
목적:관찰뇌원성신경영양인자촉진신경간세포재체내외조건하정향분화적작용,탐색신경간세포재체내외정향분화적규률.방법:실험우2006-09/2007-04재남경의과대학분자생물학실험실화동물실험중심완성.①체외연구:취잉14～16 d적배태대서뇌조직,이무혈청배양기배양획득신경간세포,수즉분성량조진행체외연구.실험조(n=10),가입5%태우혈청화20 μg/L뇌원성신경영양인자유도기체외조건하정향분화,대조조(n=10),부가입5%태우혈청,용면역형광급류식세포의적방법래검측정향분화득도적신경원급기비례.②체내연구:삼조Bavetta등적방법제작대서척수(T10)우반절4 mm장괴상결손모형.실험조(n=10):주사이식추탈양뇨감표기적세포밀도위1×109 L-1적신경간세포현액20μL.대조조(n=10):주사이식20 μL PBS우모형동물중.12주후,행랄근과양화물매신경역행시종평개척수감각화전도공능적회복정도,병취손상처척수조직행면역조직화학염색,관찰결손처타입적신경간세포적존활,분화화천이정황.결과:삼가체내실험적20지대서균진입결과분석.①체외조건하,량조신경간세포정향분화후균득도미관상관단백2양성신경원,병차실험조미관상관단백2양성신경원적비례재분화후제3천체최고봉,약위60%,이동기대조조부약위30%,차이유통계학의의(P＜0.05).②체내조건하,이식12주후,면역조직화학염색현시:체내실험조손상척수처가견추탈양뇨감표기적양성세포,차결손처가견대량신경미사상관단백화신경생장상관단백염색양성적신경원,체내대조조칙미견이상량충단백염색양성적신경원.랄근과양화물매신경역행시종현시:체내실험조뇌조직가견도부분랄근과양화물매표기양성신경원,이체내대조조미견랄근과양화물매양성신경원.결론:뇌원성신경영양인자촉진신경간세포체내외조건하정향분화위신경원,3 d체분화고봉.재체내조건하,외원적신경간세포능존활、분화、천이병체대수복척수신경전도속,유리우수손적척수공능회복.