温州医学院学报
溫州醫學院學報
온주의학원학보
JOURNAL OF WENZHOU MEDICAL COLLEGE
2007年
5期
436-439
,共4页
邹立林%丁志囡%王震%吕建新
鄒立林%丁誌囡%王震%呂建新
추립림%정지닙%왕진%려건신
血小板衍生因子-B%逆转录-聚合酶链反应%T-A克隆%实时定量%乙肝病毒表面抗原
血小闆衍生因子-B%逆轉錄-聚閤酶鏈反應%T-A剋隆%實時定量%乙肝病毒錶麵抗原
혈소판연생인자-B%역전록-취합매련반응%T-A극륭%실시정량%을간병독표면항원
目的:克隆人PDGFB mRNA的cDNA,并以此作标准品,建立TaqMan技术实时定量检测人PDGFB mRNA的方法并加以应用.方法:RT-PCR扩增人PDGFB mRNA,将纯化产物与pMD18-T载体连接,转化DH-5 α感受态细胞.提取重组质粒,以PCR扩增、限制性内切酶双酶切、测序进行鉴定,作为标准品,建立实时定量检测人PDGFB mRNA的方法,用以检测HBSAg阴性组和HBSAg阳性组PDGFB mRNA含量.结果:PCR扩增、双酶切鉴定及测序分析均证实PDGFB cDNA重组成功.实时定量检测PDGFB mRNA后发现,HBSAg阴性组和HBSAg阳性组的Ct值分别为(32.185±2.006)和(21.769±5.256),浓度分别为(1.27±0.87)×107拷贝/106PBMC和(1.24±0.58)×109拷贝/106pBMC(P＜0.05),后者PDGFB mRNA含量明显高于前者.结论:本研究成功克隆了PDGFB荧光定量PCR标准;荧光定量PCR检测人PDGFB mRNA含量具有快速、准确、简便,特异性强等优点,适用于临床检测.
目的:剋隆人PDGFB mRNA的cDNA,併以此作標準品,建立TaqMan技術實時定量檢測人PDGFB mRNA的方法併加以應用.方法:RT-PCR擴增人PDGFB mRNA,將純化產物與pMD18-T載體連接,轉化DH-5 α感受態細胞.提取重組質粒,以PCR擴增、限製性內切酶雙酶切、測序進行鑒定,作為標準品,建立實時定量檢測人PDGFB mRNA的方法,用以檢測HBSAg陰性組和HBSAg暘性組PDGFB mRNA含量.結果:PCR擴增、雙酶切鑒定及測序分析均證實PDGFB cDNA重組成功.實時定量檢測PDGFB mRNA後髮現,HBSAg陰性組和HBSAg暘性組的Ct值分彆為(32.185±2.006)和(21.769±5.256),濃度分彆為(1.27±0.87)×107拷貝/106PBMC和(1.24±0.58)×109拷貝/106pBMC(P＜0.05),後者PDGFB mRNA含量明顯高于前者.結論:本研究成功剋隆瞭PDGFB熒光定量PCR標準;熒光定量PCR檢測人PDGFB mRNA含量具有快速、準確、簡便,特異性彊等優點,適用于臨床檢測.
목적:극륭인PDGFB mRNA적cDNA,병이차작표준품,건립TaqMan기술실시정량검측인PDGFB mRNA적방법병가이응용.방법:RT-PCR확증인PDGFB mRNA,장순화산물여pMD18-T재체련접,전화DH-5 α감수태세포.제취중조질립,이PCR확증、한제성내절매쌍매절、측서진행감정,작위표준품,건립실시정량검측인PDGFB mRNA적방법,용이검측HBSAg음성조화HBSAg양성조PDGFB mRNA함량.결과:PCR확증、쌍매절감정급측서분석균증실PDGFB cDNA중조성공.실시정량검측PDGFB mRNA후발현,HBSAg음성조화HBSAg양성조적Ct치분별위(32.185±2.006)화(21.769±5.256),농도분별위(1.27±0.87)×107고패/106PBMC화(1.24±0.58)×109고패/106pBMC(P＜0.05),후자PDGFB mRNA함량명현고우전자.결론:본연구성공극륭료PDGFB형광정량PCR표준;형광정량PCR검측인PDGFB mRNA함량구유쾌속、준학、간편,특이성강등우점,괄용우림상검측.
