安徽农业科学
安徽農業科學
안휘농업과학
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES
2007年
22期
6729,6732
,共2页
小单孢菌40027菌株%TAIL-PCR%attB序列
小單孢菌40027菌株%TAIL-PCR%attB序列
소단포균40027균주%TAIL-PCR%attB서렬
[目的]为了研究链霉菌噬菌体諧31在小单孢菌40027菌株中的整合位点序列.[方法]以20 ng整合质粒pSET152的小单孢菌40027菌株基因组DNA为模板,利用3个特异性巢式引物(PF1、PF2和PF3)与随机引物AD2,通过热不对称交错PCR(TAIL-PCR)扩增稀有放线菌小单孢菌中Φ31的attB序列,用1%琼脂糖凝胶电泳来检测扩增产物的大小.[结果] 扩增结果表明,第三轮扩增产物250 bp左右的条带比第二轮对应带略小,第二轮扩增产物对应带比第一轮对应带略小,与3个特异性巢式引物预期扩增结果相符,第三轮扩增产物250 bp左右那一条带为阳性带, 经回收后,进行克隆并测序.序列分析表明:该阳性带包含Φ31在小单孢菌40027菌株中的attB序列.[结论] TAIL-PCR方法为attB序列的克隆提供了一种简便、高效的新方法.
[目的]為瞭研究鏈黴菌噬菌體諧31在小單孢菌40027菌株中的整閤位點序列.[方法]以20 ng整閤質粒pSET152的小單孢菌40027菌株基因組DNA為模闆,利用3箇特異性巢式引物(PF1、PF2和PF3)與隨機引物AD2,通過熱不對稱交錯PCR(TAIL-PCR)擴增稀有放線菌小單孢菌中Φ31的attB序列,用1%瓊脂糖凝膠電泳來檢測擴增產物的大小.[結果] 擴增結果錶明,第三輪擴增產物250 bp左右的條帶比第二輪對應帶略小,第二輪擴增產物對應帶比第一輪對應帶略小,與3箇特異性巢式引物預期擴增結果相符,第三輪擴增產物250 bp左右那一條帶為暘性帶, 經迴收後,進行剋隆併測序.序列分析錶明:該暘性帶包含Φ31在小單孢菌40027菌株中的attB序列.[結論] TAIL-PCR方法為attB序列的剋隆提供瞭一種簡便、高效的新方法.
[목적]위료연구련매균서균체해31재소단포균40027균주중적정합위점서렬.[방법]이20 ng정합질립pSET152적소단포균40027균주기인조DNA위모판,이용3개특이성소식인물(PF1、PF2화PF3)여수궤인물AD2,통과열불대칭교착PCR(TAIL-PCR)확증희유방선균소단포균중Φ31적attB서렬,용1%경지당응효전영래검측확증산물적대소.[결과] 확증결과표명,제삼륜확증산물250 bp좌우적조대비제이륜대응대략소,제이륜확증산물대응대비제일륜대응대략소,여3개특이성소식인물예기확증결과상부,제삼륜확증산물250 bp좌우나일조대위양성대, 경회수후,진행극륭병측서.서렬분석표명:해양성대포함Φ31재소단포균40027균주중적attB서렬.[결론] TAIL-PCR방법위attB서렬적극륭제공료일충간편、고효적신방법.
