重庆医学
重慶醫學
중경의학
CHONGQING MEDICAL JOURNAL
2006年
18期
1638-1640
,共3页
罗福康%沈大斌%郑红%顾涛
囉福康%瀋大斌%鄭紅%顧濤
라복강%침대빈%정홍%고도
融合蛋白%宿主菌%蛋白纯化%趋化因子%大肠杆菌
融閤蛋白%宿主菌%蛋白純化%趨化因子%大腸桿菌
융합단백%숙주균%단백순화%추화인자%대장간균
目的 确立人趋化因子SLC在大肠杆菌中的表达条件和初步纯化条件.方法 将pET32a(+)/SLC分别转化大肠杆菌AD494(DE3)、BL21trxB(DE3) 、BL21trxB(DE3)plusS,选择最佳宿主菌,优化诱导表达的条件,将大量表达的目的蛋白经金属离子亲和层析、除盐、肠激酶酶切、阳离子交换进行初步纯化.结果 pET32a(+)/SLC最佳宿主菌为BL21trxB(DE3),优化的表达条件为37℃、1mmol/L IPTG诱导3h,SDS-PAGE分析可见,表达蛋白的大小约为30kd,占菌体总蛋白的50%以上,可溶性蛋白约占50%.用SLC多克隆抗体进行Western blot分析显示,在30kd处出现单一阳性条带,而对照的pET32a(+)/BL21trxB(DE3)诱导菌则无此反应.SLC经一系列纯化步骤得到初步纯化.结论 初步建立pET32a(+)/SLC在宿主菌BL21trxB(DE3)中表达和纯化的方法.
目的 確立人趨化因子SLC在大腸桿菌中的錶達條件和初步純化條件.方法 將pET32a(+)/SLC分彆轉化大腸桿菌AD494(DE3)、BL21trxB(DE3) 、BL21trxB(DE3)plusS,選擇最佳宿主菌,優化誘導錶達的條件,將大量錶達的目的蛋白經金屬離子親和層析、除鹽、腸激酶酶切、暘離子交換進行初步純化.結果 pET32a(+)/SLC最佳宿主菌為BL21trxB(DE3),優化的錶達條件為37℃、1mmol/L IPTG誘導3h,SDS-PAGE分析可見,錶達蛋白的大小約為30kd,佔菌體總蛋白的50%以上,可溶性蛋白約佔50%.用SLC多剋隆抗體進行Western blot分析顯示,在30kd處齣現單一暘性條帶,而對照的pET32a(+)/BL21trxB(DE3)誘導菌則無此反應.SLC經一繫列純化步驟得到初步純化.結論 初步建立pET32a(+)/SLC在宿主菌BL21trxB(DE3)中錶達和純化的方法.
목적 학립인추화인자SLC재대장간균중적표체조건화초보순화조건.방법 장pET32a(+)/SLC분별전화대장간균AD494(DE3)、BL21trxB(DE3) 、BL21trxB(DE3)plusS,선택최가숙주균,우화유도표체적조건,장대량표체적목적단백경금속리자친화층석、제염、장격매매절、양리자교환진행초보순화.결과 pET32a(+)/SLC최가숙주균위BL21trxB(DE3),우화적표체조건위37℃、1mmol/L IPTG유도3h,SDS-PAGE분석가견,표체단백적대소약위30kd,점균체총단백적50%이상,가용성단백약점50%.용SLC다극륭항체진행Western blot분석현시,재30kd처출현단일양성조대,이대조적pET32a(+)/BL21trxB(DE3)유도균칙무차반응.SLC경일계렬순화보취득도초보순화.결론 초보건립pET32a(+)/SLC재숙주균BL21trxB(DE3)중표체화순화적방법.
