高等学校化学学报
高等學校化學學報
고등학교화학학보
CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES
2004年
6期
1060-1064
,共5页
怀文辉%孙庭万%俞梅敏%茹炳根
懷文輝%孫庭萬%俞梅敏%茹炳根
부문휘%손정만%유매민%여병근
胰岛素类似物%单体胰岛素%原核表达%生物学活性
胰島素類似物%單體胰島素%原覈錶達%生物學活性
이도소유사물%단체이도소%원핵표체%생물학활성
采用PCR方法, 将人胰岛素分子B链B10位His突变为Glu, 在B24和B25位之间插入Asp, 构建了\胰岛素原基因. 利用通用型质粒pBV220构建表达载体, 在大肠杆菌DH5α中表达, 表达蛋白为包含体形式, 约占菌体总蛋白的20%～30%. 经过复性和凝胶过滤得到胰岛素原融合蛋白. 用胰蛋白酶和羧肽酶B酶切, 经DEAE离子交换和RP-HPLC纯化得胰岛素突变体类似物. 用凝胶过滤法测定了蛋白质分子自身的缔合性质, 用圆二色谱测定了构象变化. 放射性免疫活性及受体结合活性测定结果表明, 突变体分子缔合性明显下降, 放免活性和受体结合活性分别约为人胰岛素的73.6%和146%.
採用PCR方法, 將人胰島素分子B鏈B10位His突變為Glu, 在B24和B25位之間插入Asp, 構建瞭\胰島素原基因. 利用通用型質粒pBV220構建錶達載體, 在大腸桿菌DH5α中錶達, 錶達蛋白為包含體形式, 約佔菌體總蛋白的20%～30%. 經過複性和凝膠過濾得到胰島素原融閤蛋白. 用胰蛋白酶和羧肽酶B酶切, 經DEAE離子交換和RP-HPLC純化得胰島素突變體類似物. 用凝膠過濾法測定瞭蛋白質分子自身的締閤性質, 用圓二色譜測定瞭構象變化. 放射性免疫活性及受體結閤活性測定結果錶明, 突變體分子締閤性明顯下降, 放免活性和受體結閤活性分彆約為人胰島素的73.6%和146%.
채용PCR방법, 장인이도소분자B련B10위His돌변위Glu, 재B24화B25위지간삽입Asp, 구건료\이도소원기인. 이용통용형질립pBV220구건표체재체, 재대장간균DH5α중표체, 표체단백위포함체형식, 약점균체총단백적20%～30%. 경과복성화응효과려득도이도소원융합단백. 용이단백매화최태매B매절, 경DEAE리자교환화RP-HPLC순화득이도소돌변체유사물. 용응효과려법측정료단백질분자자신적체합성질, 용원이색보측정료구상변화. 방사성면역활성급수체결합활성측정결과표명, 돌변체분자체합성명현하강, 방면활성화수체결합활성분별약위인이도소적73.6%화146%.
