中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2000年
6期
554-557
,共4页
马君%章金钢%李雪梅%向华%马凤龙%赵玉军%殷震
馬君%章金鋼%李雪梅%嚮華%馬鳳龍%趙玉軍%慇震
마군%장금강%리설매%향화%마봉룡%조옥군%은진
鹅细小病毒%结构蛋白基因%原核表达载体%扩增%克隆
鵝細小病毒%結構蛋白基因%原覈錶達載體%擴增%剋隆
아세소병독%결구단백기인%원핵표체재체%확증%극륭
根据已发表的鹅细小病毒(GPV)核苷酸序列设计并合成了1对引物,对GPV主要结构蛋白VP2和VP3基因进行扩增.所获得的PCR产物与预期片段大小相符,约1.8 kb.将该片段直接与真核表达pCR3.1 T载体连接,转化入感受态大肠杆菌TOP10F′中增殖.在对所提质粒进行快速鉴定、PCR扩增以及BamHⅠ酶切线性化初步鉴定的基础上,经限制性内切酶ScaⅠ和EcoRⅤ分别酶切进行正反向鉴定,获得了3个正向插入的克隆(PVPA)和2个反向插入的克隆(PVPB).将正向插入的克隆PVPA1与原核表达载体 pET-28b(+)分别用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,回收目的片段进行定向连接,并转化入感受态大肠杆菌DH5α中.对所获得的重组质粒分别经ScaⅠ、EcoRⅤ、BamHⅠ/XhoⅠ酶切,证实含有目的基因,且基因插入方向正确,成功地构建了含有GPV主要结构蛋白基因的原核表达载体,为高效原核表达以及研制更为有效的基因工程疫苗打下了基础.
根據已髮錶的鵝細小病毒(GPV)覈苷痠序列設計併閤成瞭1對引物,對GPV主要結構蛋白VP2和VP3基因進行擴增.所穫得的PCR產物與預期片段大小相符,約1.8 kb.將該片段直接與真覈錶達pCR3.1 T載體連接,轉化入感受態大腸桿菌TOP10F′中增殖.在對所提質粒進行快速鑒定、PCR擴增以及BamHⅠ酶切線性化初步鑒定的基礎上,經限製性內切酶ScaⅠ和EcoRⅤ分彆酶切進行正反嚮鑒定,穫得瞭3箇正嚮插入的剋隆(PVPA)和2箇反嚮插入的剋隆(PVPB).將正嚮插入的剋隆PVPA1與原覈錶達載體 pET-28b(+)分彆用BamHⅠ和XhoⅠ雙酶切後,迴收目的片段進行定嚮連接,併轉化入感受態大腸桿菌DH5α中.對所穫得的重組質粒分彆經ScaⅠ、EcoRⅤ、BamHⅠ/XhoⅠ酶切,證實含有目的基因,且基因插入方嚮正確,成功地構建瞭含有GPV主要結構蛋白基因的原覈錶達載體,為高效原覈錶達以及研製更為有效的基因工程疫苗打下瞭基礎.
근거이발표적아세소병독(GPV)핵감산서렬설계병합성료1대인물,대GPV주요결구단백VP2화VP3기인진행확증.소획득적PCR산물여예기편단대소상부,약1.8 kb.장해편단직접여진핵표체pCR3.1 T재체련접,전화입감수태대장간균TOP10F′중증식.재대소제질립진행쾌속감정、PCR확증이급BamHⅠ매절선성화초보감정적기출상,경한제성내절매ScaⅠ화EcoRⅤ분별매절진행정반향감정,획득료3개정향삽입적극륭(PVPA)화2개반향삽입적극륭(PVPB).장정향삽입적극륭PVPA1여원핵표체재체 pET-28b(+)분별용BamHⅠ화XhoⅠ쌍매절후,회수목적편단진행정향련접,병전화입감수태대장간균DH5α중.대소획득적중조질립분별경ScaⅠ、EcoRⅤ、BamHⅠ/XhoⅠ매절,증실함유목적기인,차기인삽입방향정학,성공지구건료함유GPV주요결구단백기인적원핵표체재체,위고효원핵표체이급연제경위유효적기인공정역묘타하료기출.
