第一军医大学学报
第一軍醫大學學報
제일군의대학학보
JOURNAL OF FIRST MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2001年
6期
455-456
,共2页
何祥梁%蒋小忠%何雪花%郭先健%黄桂君
何祥樑%蔣小忠%何雪花%郭先健%黃桂君
하상량%장소충%하설화%곽선건%황계군
逆转录病毒科%胸苷激酶%疮疹病毒1型,人%基因转染
逆轉錄病毒科%胸苷激酶%瘡疹病毒1型,人%基因轉染
역전록병독과%흉감격매%창진병독1형,인%기인전염
目的构建含TK基因逆转录病毒载体并检测其在转染细胞中的表达,为肺癌基因治疗积累实验资料.方法从PHSV106质粒中切下约2.4kb TK基因片段,插入逆转录病毒载体PLXSN多克隆位点,酶切筛选正、反向连接质粒.正向连接子电穿孔法转化肺癌细胞A549,用PCR、细胞原位杂交法分别检测TK基因整合和表达.结果经酶切鉴定得到正向连接子,电穿孔法转导A549细胞,经G418筛选出了转基因细胞,TK基因已整合在转染细胞中并阳性表达.结论成功构建了含TK基因逆转录病毒载体,转导该载体的肺癌细胞可表达TK基因.
目的構建含TK基因逆轉錄病毒載體併檢測其在轉染細胞中的錶達,為肺癌基因治療積纍實驗資料.方法從PHSV106質粒中切下約2.4kb TK基因片段,插入逆轉錄病毒載體PLXSN多剋隆位點,酶切篩選正、反嚮連接質粒.正嚮連接子電穿孔法轉化肺癌細胞A549,用PCR、細胞原位雜交法分彆檢測TK基因整閤和錶達.結果經酶切鑒定得到正嚮連接子,電穿孔法轉導A549細胞,經G418篩選齣瞭轉基因細胞,TK基因已整閤在轉染細胞中併暘性錶達.結論成功構建瞭含TK基因逆轉錄病毒載體,轉導該載體的肺癌細胞可錶達TK基因.
목적구건함TK기인역전록병독재체병검측기재전염세포중적표체,위폐암기인치료적루실험자료.방법종PHSV106질립중절하약2.4kb TK기인편단,삽입역전록병독재체PLXSN다극륭위점,매절사선정、반향련접질립.정향련접자전천공법전화폐암세포A549,용PCR、세포원위잡교법분별검측TK기인정합화표체.결과경매절감정득도정향련접자,전천공법전도A549세포,경G418사선출료전기인세포,TK기인이정합재전염세포중병양성표체.결론성공구건료함TK기인역전록병독재체,전도해재체적폐암세포가표체TK기인.
