科学通报
科學通報
과학통보
CHINESE SCIENCE BULLETIN
2003年
10期
1054-1058
,共5页
陈立%邹蓓艳%陈浩明%伍志坚%吴小兵%卢大儒%薛京伦
陳立%鄒蓓豔%陳浩明%伍誌堅%吳小兵%盧大儒%薛京倫
진립%추배염%진호명%오지견%오소병%로대유%설경륜
重组腺相关病毒载体%人凝血因子Ⅸ小基因%杂合病毒%QC-PCR
重組腺相關病毒載體%人凝血因子Ⅸ小基因%雜閤病毒%QC-PCR
중조선상관병독재체%인응혈인자Ⅸ소기인%잡합병독%QC-PCR
构建了由CMV启动子调控的人凝血因子Ⅸ小基因的重组腺相关病毒载体, 并通过HSV/AAV杂合辅助病毒的方法大量制备成重组腺相关病毒颗粒(rAAV/hFⅨ). 经Southern dot blot及QC-PCR法测定, 滴度达到3.6 × 1012 vg(病毒基因组)/mL. 将rAAV/hFⅨ病毒以7.5 × 1011 vg/只直接注射到血友病B小鼠股四头肌中, 检测到人Ⅸ因子最高表达量达到387 ng/mL血浆, 持续表达时间12周. 血浆中产生的抗体情况与表达曲线相吻合. 实验结果表明, 采用HSV/AAV杂合辅助病毒法能够有效解决AAV载体的大量制备问题, QC-PCR法检测重组腺相关病毒的滴度比传统的点杂交法更加快速准确. RT-PCR检测表明重组AAV中没有野生型HSV的污染, PCR检测表明重组AAV注射后, 重组AAV病毒仅存在于注射点附近的肌肉中, 未见扩散.
構建瞭由CMV啟動子調控的人凝血因子Ⅸ小基因的重組腺相關病毒載體, 併通過HSV/AAV雜閤輔助病毒的方法大量製備成重組腺相關病毒顆粒(rAAV/hFⅨ). 經Southern dot blot及QC-PCR法測定, 滴度達到3.6 × 1012 vg(病毒基因組)/mL. 將rAAV/hFⅨ病毒以7.5 × 1011 vg/隻直接註射到血友病B小鼠股四頭肌中, 檢測到人Ⅸ因子最高錶達量達到387 ng/mL血漿, 持續錶達時間12週. 血漿中產生的抗體情況與錶達麯線相吻閤. 實驗結果錶明, 採用HSV/AAV雜閤輔助病毒法能夠有效解決AAV載體的大量製備問題, QC-PCR法檢測重組腺相關病毒的滴度比傳統的點雜交法更加快速準確. RT-PCR檢測錶明重組AAV中沒有野生型HSV的汙染, PCR檢測錶明重組AAV註射後, 重組AAV病毒僅存在于註射點附近的肌肉中, 未見擴散.
구건료유CMV계동자조공적인응혈인자Ⅸ소기인적중조선상관병독재체, 병통과HSV/AAV잡합보조병독적방법대량제비성중조선상관병독과립(rAAV/hFⅨ). 경Southern dot blot급QC-PCR법측정, 적도체도3.6 × 1012 vg(병독기인조)/mL. 장rAAV/hFⅨ병독이7.5 × 1011 vg/지직접주사도혈우병B소서고사두기중, 검측도인Ⅸ인자최고표체량체도387 ng/mL혈장, 지속표체시간12주. 혈장중산생적항체정황여표체곡선상문합. 실험결과표명, 채용HSV/AAV잡합보조병독법능구유효해결AAV재체적대량제비문제, QC-PCR법검측중조선상관병독적적도비전통적점잡교법경가쾌속준학. RT-PCR검측표명중조AAV중몰유야생형HSV적오염, PCR검측표명중조AAV주사후, 중조AAV병독부존재우주사점부근적기육중, 미견확산.
