CAJ | 학술논문

背景与目的:大量研究已经证明,腺病毒5型ElA基因能抑制肿瘤的生长和转移,逆转其恶性表型,特别是能提高肿瘤细胞对多种化疗药物的敏感性,对射线也具有明显的增敏作用.但E1A基因通过哪些基因发挥作用还不知道.本研究利用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术在药物敏感的肿瘤细胞中分离差异表达的ElA药敏相关基因.方法:以ElA蛋白处理的人头颈淋巴结转移肿瘤细胞LN686为实验组,以亲本LN686细胞为对照组,提取mRNA,构建消减cDNA文库.随机挑取克隆,采用斑点杂交技术鉴定差异基因片段的表达水平,分析所获cDNA核苷酸序列,并在GenBank中进行比较,半定量RT-PCR鉴定实验组和对照组中新基因的mRNA水平.结果:文库包含约7 000个阳性克隆,随机挑取384个克隆进行PCR鉴定,其中362个有插入片段,通过斑点杂交技术,证实这些基因在实验组中表达水平较对照组显著提高.将这362个克隆进行测序并经过BLAST分析,表明10个为新基因,已在GenBank中登录.对其中7个新基因进行半定量RT-PCR检测,证明经E1A蛋白处理的LN686细胞中,新基因的表达水平明显高于亲本LN686细胞,相差3～8倍.结论:应用抑制性消减杂交技术筛选到10个新基因片段,为进一步克隆其全长基因、研究其功能打下基础.
배경여목적:대량연구이경증명,선병독5형ElA기인능억제종류적생장화전이,역전기악성표형,특별시능제고종류세포대다충화료약물적민감성,대사선야구유명현적증민작용.단E1A기인통과나사기인발휘작용환불지도.본연구이용억제성소감잡교(suppression subtractive hybridization,SSH)기술재약물민감적종류세포중분리차이표체적ElA약민상관기인.방법:이ElA단백처리적인두경림파결전이종류세포LN686위실험조,이친본LN686세포위대조조,제취mRNA,구건소감cDNA문고.수궤도취극륭,채용반점잡교기술감정차이기인편단적표체수평,분석소획cDNA핵감산서렬,병재GenBank중진행비교,반정량RT-PCR감정실험조화대조조중신기인적mRNA수평.결과:문고포함약7 000개양성극륭,수궤도취384개극륭진행PCR감정,기중362개유삽입편단,통과반점잡교기술,증실저사기인재실험조중표체수평교대조조현저제고.장저362개극륭진행측서병경과BLAST분석,표명10개위신기인,이재GenBank중등록.대기중7개신기인진행반정량RT-PCR검측,증명경E1A단백처리적LN686세포중,신기인적표체수평명현고우친본LN686세포,상차3～8배.결론:응용억제성소감잡교기술사선도10개신기인편단,위진일보극륭기전장기인、연구기공능타하기출.