中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2005年
3期
408-414
,共7页
李莹%药立波%刘新平%王立峰%韩月恒%林树新%俞强
李瑩%藥立波%劉新平%王立峰%韓月恆%林樹新%俞彊
리형%약립파%류신평%왕립봉%한월항%림수신%유강
RNAi%失巢凋亡%paxillin%p130Cas%胃癌细胞
RNAi%失巢凋亡%paxillin%p130Cas%胃癌細胞
RNAi%실소조망%paxillin%p130Cas%위암세포
P130Cas和paxillin分子是整合素家族下游重要的衔接分子.为了探索这两个分子在肿瘤细胞抗失巢凋亡中的作用,应用RNAi技术分别抑制抗失巢凋亡的胃癌细胞BGC823中paxillin和p130cas基因的表达,观察它们对细胞失巢性生长的影响.依据siRNA设计原则,分别设计针对p130cas和paxillin的两条序列;成功的构建了特异性封闭上述两分子的载体pWH1-P130cas和pWH1-pxaxillin.构建的载体瞬时转染贴壁培养和失巢培养的BGC823后,RT-PCR和Western印迹检测发现paxillin和p130Cas分子在mRNA及蛋白水平的表达量均明显降低;倒置显微镜下观察发现,贴壁培养的胃癌细胞发生皱缩、脱落;失巢培养的细胞聚集成团的现象受到明显抑制,细胞团比对照组小,且较松散;MTT实验结果表明,失巢培养的BGC823pWH1-paxillin组细胞存活率(32.19%±6.11%)和BGC823pWH1-p130cas组细胞存活率(28.52%±5.02%)与对照组相比显著下降(P＜0.01vscontrol);FCM实验结果发现与失巢培养的对照组相比,BGC823pWH1-paxillin和BGC823pWH1-p130cas组细胞G1期抬高,并出现了凋亡峰.运用RNAi技术分别抑制了BGC823细胞中paxillin和p130Cas分子的表达,初步证明paxillin和p130Cas是细胞存活的重要信号分子,在肿瘤细胞抗失巢凋亡过程中具有重要的作用.
P130Cas和paxillin分子是整閤素傢族下遊重要的銜接分子.為瞭探索這兩箇分子在腫瘤細胞抗失巢凋亡中的作用,應用RNAi技術分彆抑製抗失巢凋亡的胃癌細胞BGC823中paxillin和p130cas基因的錶達,觀察它們對細胞失巢性生長的影響.依據siRNA設計原則,分彆設計針對p130cas和paxillin的兩條序列;成功的構建瞭特異性封閉上述兩分子的載體pWH1-P130cas和pWH1-pxaxillin.構建的載體瞬時轉染貼壁培養和失巢培養的BGC823後,RT-PCR和Western印跡檢測髮現paxillin和p130Cas分子在mRNA及蛋白水平的錶達量均明顯降低;倒置顯微鏡下觀察髮現,貼壁培養的胃癌細胞髮生皺縮、脫落;失巢培養的細胞聚集成糰的現象受到明顯抑製,細胞糰比對照組小,且較鬆散;MTT實驗結果錶明,失巢培養的BGC823pWH1-paxillin組細胞存活率(32.19%±6.11%)和BGC823pWH1-p130cas組細胞存活率(28.52%±5.02%)與對照組相比顯著下降(P＜0.01vscontrol);FCM實驗結果髮現與失巢培養的對照組相比,BGC823pWH1-paxillin和BGC823pWH1-p130cas組細胞G1期抬高,併齣現瞭凋亡峰.運用RNAi技術分彆抑製瞭BGC823細胞中paxillin和p130Cas分子的錶達,初步證明paxillin和p130Cas是細胞存活的重要信號分子,在腫瘤細胞抗失巢凋亡過程中具有重要的作用.
P130Cas화paxillin분자시정합소가족하유중요적함접분자.위료탐색저량개분자재종류세포항실소조망중적작용,응용RNAi기술분별억제항실소조망적위암세포BGC823중paxillin화p130cas기인적표체,관찰타문대세포실소성생장적영향.의거siRNA설계원칙,분별설계침대p130cas화paxillin적량조서렬;성공적구건료특이성봉폐상술량분자적재체pWH1-P130cas화pWH1-pxaxillin.구건적재체순시전염첩벽배양화실소배양적BGC823후,RT-PCR화Western인적검측발현paxillin화p130Cas분자재mRNA급단백수평적표체량균명현강저;도치현미경하관찰발현,첩벽배양적위암세포발생추축、탈락;실소배양적세포취집성단적현상수도명현억제,세포단비대조조소,차교송산;MTT실험결과표명,실소배양적BGC823pWH1-paxillin조세포존활솔(32.19%±6.11%)화BGC823pWH1-p130cas조세포존활솔(28.52%±5.02%)여대조조상비현저하강(P＜0.01vscontrol);FCM실험결과발현여실소배양적대조조상비,BGC823pWH1-paxillin화BGC823pWH1-p130cas조세포G1기태고,병출현료조망봉.운용RNAi기술분별억제료BGC823세포중paxillin화p130Cas분자적표체,초보증명paxillin화p130Cas시세포존활적중요신호분자,재종류세포항실소조망과정중구유중요적작용.
