CAJ | 학술논문

背景与目的:防御素是天然免疫的重要分子,小鼠beta防御素2(murine beta defensin 2,MBD2)是防御素家族的重要成员,在天然免疫和获得性免疫中具有桥梁作用.本研究观察携带MBD2的间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)对小鼠恶性腹水的抑制作用.方法:从BALB/c小鼠肾脏中提取总RNA,通过逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)得到小鼠MBD2片段.构建、包装表达MBD2的慢病毒Lentivirus系统.用所得病毒感染MSC,经筛选得到稳定表达MBD2的MSC,RT-PCR验证MBD2的表达.取稳定表达MBD2的MSC培养上清用于趋化树突细胞实验.BALB/c小鼠腹腔接种MethA细胞,于接种后第2、4、6、8天腹腔注射筛选所得表达MBD2的MSC或生理盐水、未感染病毒的MSC、感染Null-Lentivirus病毒的MSC,观察恶性腹水产生情况、腹水性状及荷瘤小鼠存活情况.对于长期存活小鼠,再次腹腔注射MethA肿瘤细胞,观察存活情况.结果:在MBD2-Lentivirus感染后的MSC中顺利扩增出MBD2片段.MBD2组细胞培养上清对树突细胞有较强的趋化作用[(43±8)个],明显高于生理盐水(NS)组[(8±1)个]、MSC组[(14±2)个]和Null组[(12±3)个],差异有显著性(P＜0.01).经表达MBD2的MSC处理的荷瘤小鼠腹水血性程度不明显,腹水总量[(3.0±1.0)ml]明显少于NS组[(10.8±1.0)ml]、MSC组[(10.2±1.3)ml]和Null组[(9.8±1.6)ml],差异有显著性(P＜0.05).MBD2组在肿瘤接种后第40天仍有小鼠存活,而各对照组至肿瘤接种后第20天已全部死亡,MBD2组存活时间显著长于对照组(P＜0.05).长期存活的MBD2组小鼠经MethA肿瘤细胞再次腹腔接种,其存活时间仍长于未作任何处理的对照组小鼠.结论:成功构建了以MSC为载体的MBD2基因治疗系统,经腹腔注射可以抑制恶性腹水的生长.
배경여목적:방어소시천연면역적중요분자,소서beta방어소2(murine beta defensin 2,MBD2)시방어소가족적중요성원,재천연면역화획득성면역중구유교량작용.본연구관찰휴대MBD2적간충질간세포(mesenchymal stem cell,MSC)대소서악성복수적억제작용.방법:종BALB/c소서신장중제취총RNA,통과역전록취합매련반응(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)득도소서MBD2편단.구건、포장표체MBD2적만병독Lentivirus계통.용소득병독감염MSC,경사선득도은정표체MBD2적MSC,RT-PCR험증MBD2적표체.취은정표체MBD2적MSC배양상청용우추화수돌세포실험.BALB/c소서복강접충MethA세포,우접충후제2、4、6、8천복강주사사선소득표체MBD2적MSC혹생리염수、미감염병독적MSC、감염Null-Lentivirus병독적MSC,관찰악성복수산생정황、복수성상급하류소서존활정황.대우장기존활소서,재차복강주사MethA종류세포,관찰존활정황.결과:재MBD2-Lentivirus감염후적MSC중순리확증출MBD2편단.MBD2조세포배양상청대수돌세포유교강적추화작용[(43±8)개],명현고우생리염수(NS)조[(8±1)개]、MSC조[(14±2)개]화Null조[(12±3)개],차이유현저성(P＜0.01).경표체MBD2적MSC처리적하류소서복수혈성정도불명현,복수총량[(3.0±1.0)ml]명현소우NS조[(10.8±1.0)ml]、MSC조[(10.2±1.3)ml]화Null조[(9.8±1.6)ml],차이유현저성(P＜0.05).MBD2조재종류접충후제40천잉유소서존활,이각대조조지종류접충후제20천이전부사망,MBD2조존활시간현저장우대조조(P＜0.05).장기존활적MBD2조소서경MethA종류세포재차복강접충,기존활시간잉장우미작임하처리적대조조소서.결론:성공구건료이MSC위재체적MBD2기인치료계통,경복강주사가이억제악성복수적생장.