免疫学杂志
免疫學雜誌
면역학잡지
IMMUNOLOGICAL JOURNAL
2007年
2期
144-147,151
,共5页
应跃斌%李丹曦%潘映秋%薛乔%孙红颖%陈枢青
應躍斌%李丹晞%潘映鞦%薛喬%孫紅穎%陳樞青
응약빈%리단희%반영추%설교%손홍영%진추청
肠毒素%超抗原%克隆表达%组氨酸标签%亲和纯化
腸毒素%超抗原%剋隆錶達%組氨痠標籤%親和純化
장독소%초항원%극륭표체%조안산표첨%친화순화
目的 克隆金黄色葡萄球菌肠毒素C2(SEC2)基因,添加亲和纯化标签进行原核表达,并对表达产物进行生物学活性分析.方法 通过PCR从pGEM-T-SEC2质粒中亚克隆得到带有编码6个组氨酸的核苷酸序列的基因片断,构建了表达质粒pET-28a-SEC2,转化至大肠杆菌BL21中诱导表达.利用亲和层析纯化rSEC2,并采用MTT法对纯化后的rSEC2和天然SEC2生物学活性进行研究和比较.结果 表达质粒pET-28a-SEC2通过测序,表明已连入正确表达目的蛋白的核苷酸序列.含有该质粒的表达菌株经IPTG诱导,产生约占菌体总蛋白40%的可溶性重组蛋白.SDS-PAGE显示,经Ni2+亲和柱纯化的目的蛋白达到了电泳纯.MTT法表明该rSEC2和天然SEC2均有显著的超抗原活性.结论 成功构建了pET-28a-SEC2表达质粒,获得了与天然SEC2有着类似超抗原活性的高纯度rSEC2,为进一步研究该蛋白的抗肿瘤活性奠定了基础.
目的 剋隆金黃色葡萄毬菌腸毒素C2(SEC2)基因,添加親和純化標籤進行原覈錶達,併對錶達產物進行生物學活性分析.方法 通過PCR從pGEM-T-SEC2質粒中亞剋隆得到帶有編碼6箇組氨痠的覈苷痠序列的基因片斷,構建瞭錶達質粒pET-28a-SEC2,轉化至大腸桿菌BL21中誘導錶達.利用親和層析純化rSEC2,併採用MTT法對純化後的rSEC2和天然SEC2生物學活性進行研究和比較.結果 錶達質粒pET-28a-SEC2通過測序,錶明已連入正確錶達目的蛋白的覈苷痠序列.含有該質粒的錶達菌株經IPTG誘導,產生約佔菌體總蛋白40%的可溶性重組蛋白.SDS-PAGE顯示,經Ni2+親和柱純化的目的蛋白達到瞭電泳純.MTT法錶明該rSEC2和天然SEC2均有顯著的超抗原活性.結論 成功構建瞭pET-28a-SEC2錶達質粒,穫得瞭與天然SEC2有著類似超抗原活性的高純度rSEC2,為進一步研究該蛋白的抗腫瘤活性奠定瞭基礎.
목적 극륭금황색포도구균장독소C2(SEC2)기인,첨가친화순화표첨진행원핵표체,병대표체산물진행생물학활성분석.방법 통과PCR종pGEM-T-SEC2질립중아극륭득도대유편마6개조안산적핵감산서렬적기인편단,구건료표체질립pET-28a-SEC2,전화지대장간균BL21중유도표체.이용친화층석순화rSEC2,병채용MTT법대순화후적rSEC2화천연SEC2생물학활성진행연구화비교.결과 표체질립pET-28a-SEC2통과측서,표명이련입정학표체목적단백적핵감산서렬.함유해질립적표체균주경IPTG유도,산생약점균체총단백40%적가용성중조단백.SDS-PAGE현시,경Ni2+친화주순화적목적단백체도료전영순.MTT법표명해rSEC2화천연SEC2균유현저적초항원활성.결론 성공구건료pET-28a-SEC2표체질립,획득료여천연SEC2유착유사초항원활성적고순도rSEC2,위진일보연구해단백적항종류활성전정료기출.
