中国兽医科学
中國獸醫科學
중국수의과학
VETERINARY SCIENCE IN CHINA
2007年
2期
145-149
,共5页
蔡月琴%马益萍%申会刚%郭军庆%周继勇
蔡月琴%馬益萍%申會剛%郭軍慶%週繼勇
채월금%마익평%신회강%곽군경%주계용
狂犬病病毒%核蛋白%高效表达%蛋白纯化
狂犬病病毒%覈蛋白%高效錶達%蛋白純化
광견병병독%핵단백%고효표체%단백순화
为获得狂犬病病毒(RV)核蛋白抗原,采用RT-PCR方法从狂犬病病毒ERA株中扩增了RV核蛋白基因,分别亚克隆到原核表达载体pET-28a(+)和pET-32a(+)中,经PCR和双酶切鉴定以及序列测定,重组质粒构建成功.将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,表达的核蛋白再经Ni2+-NTA亲和层析纯化.结果显示,核蛋白在pET-32a(+)中的表达量(30.4%)高于在pET-28a(+)中的表达量(19.4%),培养物中的高纯度核蛋白产量分别为13.6和8.45 mg/L.经Western-blotting检测,不同载体表达的核蛋白均可被兔抗RV多克隆抗体特异识别,表明核蛋白具有良好的反应原性.
為穫得狂犬病病毒(RV)覈蛋白抗原,採用RT-PCR方法從狂犬病病毒ERA株中擴增瞭RV覈蛋白基因,分彆亞剋隆到原覈錶達載體pET-28a(+)和pET-32a(+)中,經PCR和雙酶切鑒定以及序列測定,重組質粒構建成功.將重組質粒轉化到大腸桿菌BL21(DE3)中進行錶達,錶達的覈蛋白再經Ni2+-NTA親和層析純化.結果顯示,覈蛋白在pET-32a(+)中的錶達量(30.4%)高于在pET-28a(+)中的錶達量(19.4%),培養物中的高純度覈蛋白產量分彆為13.6和8.45 mg/L.經Western-blotting檢測,不同載體錶達的覈蛋白均可被兔抗RV多剋隆抗體特異識彆,錶明覈蛋白具有良好的反應原性.
위획득광견병병독(RV)핵단백항원,채용RT-PCR방법종광견병병독ERA주중확증료RV핵단백기인,분별아극륭도원핵표체재체pET-28a(+)화pET-32a(+)중,경PCR화쌍매절감정이급서렬측정,중조질립구건성공.장중조질립전화도대장간균BL21(DE3)중진행표체,표체적핵단백재경Ni2+-NTA친화층석순화.결과현시,핵단백재pET-32a(+)중적표체량(30.4%)고우재pET-28a(+)중적표체량(19.4%),배양물중적고순도핵단백산량분별위13.6화8.45 mg/L.경Western-blotting검측,불동재체표체적핵단백균가피토항RV다극륭항체특이식별,표명핵단백구유량호적반응원성.
