生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2004年
6期
879-883
,共5页
沈利%宋大新%高卜渝%吕红%李育阳
瀋利%宋大新%高蔔渝%呂紅%李育暘
침리%송대신%고복투%려홍%리육양
人纤溶蛋白酶原K5%酵母%分泌表达%内皮细胞增殖分析
人纖溶蛋白酶原K5%酵母%分泌錶達%內皮細胞增殖分析
인섬용단백매원K5%효모%분비표체%내피세포증식분석
化学合成人纤溶蛋白酶原K5(pK5)的编码基因并克隆到毕赤氏酵母表达系统的分泌型载体pPIC9K上,将重组质粒经BglⅡ单酶切后电转化Pichia pastoris GS115菌株,筛选出对G418有高抗性和在MM培养基上生长缓慢的转化子.经摇瓶发酵和甲醇诱导后,用15%SDS-PAGE检测发酵上清液,表明有重组蛋白pK5的高表达.经CM-Sepherose离子交换柱和Superdex 75分子筛层析两步分离纯化,获得了纯度达到98%的rpK5.用MTT方法检测的结果表明,纯化的rpK5可显著地抑制人血管内皮细胞的生长.
化學閤成人纖溶蛋白酶原K5(pK5)的編碼基因併剋隆到畢赤氏酵母錶達繫統的分泌型載體pPIC9K上,將重組質粒經BglⅡ單酶切後電轉化Pichia pastoris GS115菌株,篩選齣對G418有高抗性和在MM培養基上生長緩慢的轉化子.經搖瓶髮酵和甲醇誘導後,用15%SDS-PAGE檢測髮酵上清液,錶明有重組蛋白pK5的高錶達.經CM-Sepherose離子交換柱和Superdex 75分子篩層析兩步分離純化,穫得瞭純度達到98%的rpK5.用MTT方法檢測的結果錶明,純化的rpK5可顯著地抑製人血管內皮細胞的生長.
화학합성인섬용단백매원K5(pK5)적편마기인병극륭도필적씨효모표체계통적분비형재체pPIC9K상,장중조질립경BglⅡ단매절후전전화Pichia pastoris GS115균주,사선출대G418유고항성화재MM배양기상생장완만적전화자.경요병발효화갑순유도후,용15%SDS-PAGE검측발효상청액,표명유중조단백pK5적고표체.경CM-Sepherose리자교환주화Superdex 75분자사층석량보분리순화,획득료순도체도98%적rpK5.용MTT방법검측적결과표명,순화적rpK5가현저지억제인혈관내피세포적생장.
