中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2006年
8期
712-715
,共4页
结核分枝杆菌%热休克蛋白%载体%克隆%表达与鉴定
結覈分枝桿菌%熱休剋蛋白%載體%剋隆%錶達與鑒定
결핵분지간균%열휴극단백%재체%극륭%표체여감정
目的 对结核分枝杆菌的一种热休克蛋白Hsp70基因进行克隆,鉴定,并在原核系统中表达.方法 以结核杆菌H37Rv菌株基因组DNA为模板,用PCR法对基因Hsp70进行扩增,产物与载体质粒pET-22b(+)构建表达Hsp70的重组质粒,将此重组质粒先转化到E.coli DH5 α内提取质粒,酶切鉴定,再转化入表达宿主E.coli BL21(DE3)PlysS菌株内,对转化菌株以IPTG进行诱导后,破菌,离心,上清进行SDS-PAGE,通过电转移将胶中蛋白转到硝酸纤维素薄膜上后进行免疫印迹分析.结果 电泳发现转化了重组质粒的菌株有表达蛋白,所表达的蛋白质相对分子质量为70 000,抗体检测有特异带大小为70kDa.结论 成功进行了结核杆菌分泌热休克蛋白Hsp70基因的克隆表达.
目的 對結覈分枝桿菌的一種熱休剋蛋白Hsp70基因進行剋隆,鑒定,併在原覈繫統中錶達.方法 以結覈桿菌H37Rv菌株基因組DNA為模闆,用PCR法對基因Hsp70進行擴增,產物與載體質粒pET-22b(+)構建錶達Hsp70的重組質粒,將此重組質粒先轉化到E.coli DH5 α內提取質粒,酶切鑒定,再轉化入錶達宿主E.coli BL21(DE3)PlysS菌株內,對轉化菌株以IPTG進行誘導後,破菌,離心,上清進行SDS-PAGE,通過電轉移將膠中蛋白轉到硝痠纖維素薄膜上後進行免疫印跡分析.結果 電泳髮現轉化瞭重組質粒的菌株有錶達蛋白,所錶達的蛋白質相對分子質量為70 000,抗體檢測有特異帶大小為70kDa.結論 成功進行瞭結覈桿菌分泌熱休剋蛋白Hsp70基因的剋隆錶達.
목적 대결핵분지간균적일충열휴극단백Hsp70기인진행극륭,감정,병재원핵계통중표체.방법 이결핵간균H37Rv균주기인조DNA위모판,용PCR법대기인Hsp70진행확증,산물여재체질립pET-22b(+)구건표체Hsp70적중조질립,장차중조질립선전화도E.coli DH5 α내제취질립,매절감정,재전화입표체숙주E.coli BL21(DE3)PlysS균주내,대전화균주이IPTG진행유도후,파균,리심,상청진행SDS-PAGE,통과전전이장효중단백전도초산섬유소박막상후진행면역인적분석.결과 전영발현전화료중조질립적균주유표체단백,소표체적단백질상대분자질량위70 000,항체검측유특이대대소위70kDa.결론 성공진행료결핵간균분비열휴극단백Hsp70기인적극륭표체.
