中国肿瘤临床
中國腫瘤臨床
중국종류림상
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL ONCOLOGY
2007年
1期
18-21
,共4页
王静%吴军正%魏红宇%付善民%郭富平%温德升
王靜%吳軍正%魏紅宇%付善民%郭富平%溫德升
왕정%오군정%위홍우%부선민%곽부평%온덕승
转化生长因子-β1%shRNA%涎腺粘液表皮样癌
轉化生長因子-β1%shRNA%涎腺粘液錶皮樣癌
전화생장인자-β1%shRNA%연선점액표피양암
目的:用TGF-β1 shRNA稳定转染涎腺粘液表皮样癌Ms细胞,观察shRNA的基因沉默效应及其对细胞增殖的影响.方法:用Liperfetamine 2000将TGF-β1 shRNA转染Ms细胞,以G418(600 mg/L)筛选21 d,挑出单克隆获得稳定转染细胞系.RT-PCR法和免疫组化方法检测细胞中TGF-β1 mRNA和蛋白的表达.利用MTT、软琼脂克隆形成实验、流式细胞仪、透射电镜等检测转染前后Ms细胞的增殖和形态特点,以空载体转染和未转染细胞为对照.结果:获得稳定转染TGF-β1 shRNA的细胞系.TGF-β1 shRNA阻断了Ms细胞中TGF-β1 mRNA和蛋白的表达.未转染组,转染空载体组和转染shRNA组,细胞倍增时间分别为39.3 h,40.1 h和45.3 h,Gl期细胞所占比例分别为54.2%,56.8%和61.7%,增殖指数PI分别为0.46,0.43和0.38;软琼脂克隆形成率分别为34.7%,33.3%和15.8%;超微结构观察见转染细胞细胞器扩张和肿胀,核浆比例变小,核仁减小,数目减少,核分裂像减少.结论:应用shRNA沉默TGF-β1基因可抑制Ms细胞的增殖.
目的:用TGF-β1 shRNA穩定轉染涎腺粘液錶皮樣癌Ms細胞,觀察shRNA的基因沉默效應及其對細胞增殖的影響.方法:用Liperfetamine 2000將TGF-β1 shRNA轉染Ms細胞,以G418(600 mg/L)篩選21 d,挑齣單剋隆穫得穩定轉染細胞繫.RT-PCR法和免疫組化方法檢測細胞中TGF-β1 mRNA和蛋白的錶達.利用MTT、軟瓊脂剋隆形成實驗、流式細胞儀、透射電鏡等檢測轉染前後Ms細胞的增殖和形態特點,以空載體轉染和未轉染細胞為對照.結果:穫得穩定轉染TGF-β1 shRNA的細胞繫.TGF-β1 shRNA阻斷瞭Ms細胞中TGF-β1 mRNA和蛋白的錶達.未轉染組,轉染空載體組和轉染shRNA組,細胞倍增時間分彆為39.3 h,40.1 h和45.3 h,Gl期細胞所佔比例分彆為54.2%,56.8%和61.7%,增殖指數PI分彆為0.46,0.43和0.38;軟瓊脂剋隆形成率分彆為34.7%,33.3%和15.8%;超微結構觀察見轉染細胞細胞器擴張和腫脹,覈漿比例變小,覈仁減小,數目減少,覈分裂像減少.結論:應用shRNA沉默TGF-β1基因可抑製Ms細胞的增殖.
목적:용TGF-β1 shRNA은정전염연선점액표피양암Ms세포,관찰shRNA적기인침묵효응급기대세포증식적영향.방법:용Liperfetamine 2000장TGF-β1 shRNA전염Ms세포,이G418(600 mg/L)사선21 d,도출단극륭획득은정전염세포계.RT-PCR법화면역조화방법검측세포중TGF-β1 mRNA화단백적표체.이용MTT、연경지극륭형성실험、류식세포의、투사전경등검측전염전후Ms세포적증식화형태특점,이공재체전염화미전염세포위대조.결과:획득은정전염TGF-β1 shRNA적세포계.TGF-β1 shRNA조단료Ms세포중TGF-β1 mRNA화단백적표체.미전염조,전염공재체조화전염shRNA조,세포배증시간분별위39.3 h,40.1 h화45.3 h,Gl기세포소점비례분별위54.2%,56.8%화61.7%,증식지수PI분별위0.46,0.43화0.38;연경지극륭형성솔분별위34.7%,33.3%화15.8%;초미결구관찰견전염세포세포기확장화종창,핵장비례변소,핵인감소,수목감소,핵분렬상감소.결론:응용shRNA침묵TGF-β1기인가억제Ms세포적증식.
