CAJ | 학술논문

采用基因定点突变的方法,构建了细菌视紫红质(Bacteriorhodopsin,BR)的3种突变体蛋白,即单突变体BRE194Q、三突变体BR1119T/T121S/A126T和四突变体BR1119T/T121S/A126T/E194Q.测定了突变体和野生型BR在水溶液和聚乙烯醇(PVA)膜中的紫外-可见吸收光谱和拉曼光谱,采用显微视频录像技术记录了PVA膜中野生型和3个突变体样品的M态寿命.与野生型BR相比较,在水溶液中,单突变体的可见吸收光谱的最大吸收峰发生了轻微红移,三突变体和四突变体的最大吸收峰则分别发生了11.0和12.0 nm的明显蓝移.在PVA膜中,3个突变体BR的可见吸收光谱的最大吸收峰均发生蓝移,四突变体BR的最大吸收峰为557 nm,蓝移达15.0 nm.四突变体BR在水溶液中的共振拉曼光谱不仅表现有与M态特征相关的1567和1573 cm-1谱带,还有L态特征带1334 cm-1及N态特征带1200,1328,1530和1549 cm-1.在PVA膜中的样品与在水溶液中的比较,四突变体共振拉曼光谱的1334和1549 cm-1带消失,同时1187 cm-1带的强度下降.显微视频录像技术记录的PVA膜中样品的M态寿命表明,野生型BR的M态寿命最短,单突变体的M态寿命小于1.0 s,三突变体的寿命为3.0 s,四突变体的寿命为2.0 s.
채용기인정점돌변적방법,구건료세균시자홍질(Bacteriorhodopsin,BR)적3충돌변체단백,즉단돌변체BRE194Q、삼돌변체BR1119T/T121S/A126T화사돌변체BR1119T/T121S/A126T/E194Q.측정료돌변체화야생형BR재수용액화취을희순(PVA)막중적자외-가견흡수광보화랍만광보,채용현미시빈록상기술기록료PVA막중야생형화3개돌변체양품적M태수명.여야생형BR상비교,재수용액중,단돌변체적가견흡수광보적최대흡수봉발생료경미홍이,삼돌변체화사돌변체적최대흡수봉칙분별발생료11.0화12.0 nm적명현람이.재PVA막중,3개돌변체BR적가견흡수광보적최대흡수봉균발생람이,사돌변체BR적최대흡수봉위557 nm,람이체15.0 nm.사돌변체BR재수용액중적공진랍만광보불부표현유여M태특정상관적1567화1573 cm-1보대,환유L태특정대1334 cm-1급N태특정대1200,1328,1530화1549 cm-1.재PVA막중적양품여재수용액중적비교,사돌변체공진랍만광보적1334화1549 cm-1대소실,동시1187 cm-1대적강도하강.현미시빈록상기술기록적PVA막중양품적M태수명표명,야생형BR적M태수명최단,단돌변체적M태수명소우1.0 s,삼돌변체적수명위3.0 s,사돌변체적수명위2.0 s.