CAJ | 학술논문

β淀粉样肽(Aβ)在阿尔茨海默病(AD)患者脑内的产生、聚集和沉积是AD的一个固有病理特征,也被普遍认为是AD的重要发病机理之一.β-分泌酶(BACE)对淀粉样前体蛋白(APP)的裂解是Aβ产生的关键步骤,β-分泌酶抑制剂是AD药物治疗的一个重要发展方向,因此对BACE结构的了解具有重要意义.利用受体漂白荧光共振能量转移(FRET)技术首次在活细胞内研究BACE的二聚化结构.通过基因工程技术分别构建了青色荧光蛋白(CFP)和黄色荧光蛋白(YFP)标记的全长BACE(BACE-FL)和BACE活性部分(BACE-NT),应用共聚焦荧光显微镜和受体漂白FRET技术研究了BACE-FL和BACE-NT在细胞中的表达和定位,以及它们在活细胞内的存在形式.实验结果表明:a.BACE-FL在内质网至细胞膜均有表达,主要分布在高尔基体、细胞膜和内体等细胞器中,而BACE-NT则被滞留在内质网里.b.BACE-NT是单体结构,而BACE-FL在活细胞内则以二聚体的形式存在.证明,BACE的跨膜序列和C端对BACE的转运和定位具有重要作用,其二聚体结构由这些序列决定,而不由其活性位点决定.
β정분양태(Aβ)재아이자해묵병(AD)환자뇌내적산생、취집화침적시AD적일개고유병리특정,야피보편인위시AD적중요발병궤리지일.β-분비매(BACE)대정분양전체단백(APP)적렬해시Aβ산생적관건보취,β-분비매억제제시AD약물치료적일개중요발전방향,인차대BACE결구적료해구유중요의의.이용수체표백형광공진능량전이(FRET)기술수차재활세포내연구BACE적이취화결구.통과기인공정기술분별구건료청색형광단백(CFP)화황색형광단백(YFP)표기적전장BACE(BACE-FL)화BACE활성부분(BACE-NT),응용공취초형광현미경화수체표백FRET기술연구료BACE-FL화BACE-NT재세포중적표체화정위,이급타문재활세포내적존재형식.실험결과표명:a.BACE-FL재내질망지세포막균유표체,주요분포재고이기체、세포막화내체등세포기중,이BACE-NT칙피체류재내질망리.b.BACE-NT시단체결구,이BACE-FL재활세포내칙이이취체적형식존재.증명,BACE적과막서렬화C단대BACE적전운화정위구유중요작용,기이취체결구유저사서렬결정,이불유기활성위점결정.